tailieunhanh - Biểu hiện và tinh sạch chitinase từ Bacillus thuringiensis serovar kurstaki trong vi khuẩn Escherichia coli

Bài viết trình bày việc phân lập được chủng vi khuẩn B. thuringiensis serovar kurstaki (Btk) có khả năng thủy phân chitin cao. Chủng Btk đã được dùng để tạo chế phẩm kháng nấm gây bệnh thực vật và diệt côn trùng gây hại, tuy nhiên hiệu suất còn thấp và khó nâng cao hiệu quả sinh tổng hợp của chitinase - enzyme chìa khóa quyết định hiệu quả phòng bệnh của chế phẩm. | Biểu hiện và tinh sạch chitinase từ Bacillus thuringiensis serovar kurstaki trong vi khuẩn Escherichia coli Tạp chí Công nghệ Sinh học 15(3): 571-579, 2017 BIỂU HIỆN VÀ TINH SẠCH CHITINASE TỪ BACILLUS THURINGIENSIS SEROVAR KURSTAKI TRONG VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI Trịnh Thị Thu Hà1,2, Đồng Văn Quyền1,2, Ngô Đình Bính1, * 1 Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2 Học viện Khoa học và Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam * Người chịu trách nhiệm liên lạc. E-mail: Ngày gửi bài: Ngày nhận đăng: TÓM TẮT Trong nghiên cứu trước, chúng tôi đã phân lập được chủng vi khuẩn B. thuringiensis serovar kurstaki (Btk) có khả năng thủy phân chitin cao. Chủng Btk đã được dùng để tạo chế phẩm kháng nấm gây bệnh thực vật và diệt côn trùng gây hại, tuy nhiên hiệu suất còn thấp và khó nâng cao hiệu quả sinh tổng hợp của chitinase - enzyme chìa khóa quyết định hiệu quả phòng bệnh của chế phẩm. Để khắc phục hạn chế này các nhà nghiên cứu áp dụng công nghệ protein tái tổ hợp để sản xuất chitinase qui mô công nghiệp. Hướng đi này giúp nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp chitinase đồng thời dễ dàng tinh sạch và thu hồi enzyme hơn so với việc sử dụng chủng tự nhiên. Nhằm mục đích thu được lượng lớn enzyme có hoạt tính cao, chúng tôi tiến hành biểu hiện và thu nhận chitinase tái tổ hợp (rChiA) từ chủng Btk trong E. coli. Gene mã hóa chitinase của chủng Btk được thiết kế vào vector biểu hiện pET28b(+) tại vị trí EcoRI và XhoI. Protein tái tổ hợp được biểu hiện ở dạng tan và vẫn duy trì hoạt tính sinh học. Hoạt tính của chitinase tái tổ hợp tăng 1,26 lần so với chitinase tự nhiên. rChiA được tinh sạch thành công bằng sắc ký ái lực sử dụng cột Probond Nikel Resin. Kết quả thử nghiệm cho thấy, chitinase tái tổ hợp có khả năng kháng 2 loại nấm gây bệnh thực vật là Fusarium oxysporum và Rhizoctinia solani nhưng không gây ảnh hưởng đến Mucor