tailieunhanh - So sánh hai phương pháp tổng hợp gen caf1 mã hóa kháng nguyên vỏ F1 của vi khuẩn Yersina pestis

Trong nghiên cứu này, hai phương pháp tổng hợp gen caf1, mã hóa kháng nguyên F1,nhằm biểu hiệu trong tế bào E. coli được trình bày. Sau khi tối ưu trình tự mã bộ ba cho sự biểu hiện trong tế bào vật chủ E. coli, các đoạn oligos ngắn được thiết kế và tổng hợp, gen caf1 được tổng hợp nhân tạo bằng hai phương pháp: “gapless” PCR và TBIO. | So sánh hai phương pháp tổng hợp gen caf1 mã hóa kháng nguyên vỏ F1 của vi khuẩn Yersina pestis Hóa học & Kỹ thuật môi trường SO SÁNH HAI PHƯƠNG PHÁP TỔNG HỢP GEN caf1 MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN VỎ F1 CỦA VI KHUẨN Yersina pestis Nguyễn Phượng Minh1*, Lê Trọng Tài1, Ngô Ngọc Trung1, Nguyễn Ngọc Hưng2 Tóm tắt: Với sự phát triển của ngành sinh học phân tử, việc tổng hợp một trình tự DNA có trình tự mong muốn đang ngày càng tăng lên và dễ dàng hơn. Tuy nhiên một số trình tự gen độc, có tính nguy hiểm có thể không được tổng hợp do liên quan đến vấn đề an toàn. Vì vậy việc chủ động tổng hợp được các trình tự gen mong muốn sẽ có ý nghĩa lớn trong nghiên cứu, chủ động được thời gian và công việc. Trong nghiên cứu này, hai phương pháp tổng hợpgen caf1, mã hóa kháng nguyên F1,nhằm biểu hiệu trong tế bào E. coli được trình bày. Sau khi tối ưu trình tựmã bộ ba cho sự biểu hiện trong tế bào vật chủ E. coli, các đoạn oligos ngắn được thiết kế và tổng hợp, gen caf1được tổng hợp nhân tạo bằng hai phương pháp: “gapless” PCR và TBIO. Tiếp đó, trình tự gen đã tổng hợp được đưa vào vector tách dòng để kiểm tra khả năng tổng hợp và so sánh giữa hai phương tự gen đúng được biểu hiện trong tế bàoE. coli. Kết quả giải trình tự cho thấy phương pháp này cho phép tổng hợp được trình tự gen mục tiêu với độ chính xác là 2/6 dòng plasmid. Trình tự gen này đã được đưa vào vector pET-22b(+) và biểu hiện trong tế bào E. coli BL21 (DE3) ở dạng dung hợp với đuôi ái lực (His)10. Các kết quả điện di protein SDS-PAGE, tinh sạch protein bằng sắc ký ái lực Nikelvà Western blot cho thấy kháng nguyên tái tổ hợp F1 đã được tạo ra thành công ở dạng tan trong tế bào E. coli. Từ khóa: Kháng nguyên F1; Tổng hợp gen; Gen caf1. 1. MỞ ĐẦU Dịch hạch là một bệnh truyền nhiễm tiến triển cấp tính, cực nguy hiểm do vi khuẩn Yersinia pestis gây ra. Bệnh lưu hành trong quần thể một số loài động vật gặm nhấm (chủ yếu là chuột) và bọ chét