tailieunhanh - Nghiên cứu tái gấp cuộn Protein Leptin người tái tổ hợp từ thề vùi của Escherichia coli
Leptin là một hormone có bản chất protein, được tiết ra chủ yếu từ mô mỡ, có vai trò quan trọng trong điều hòa lượng thức ăn và quá trình tiêu hao năng lượng của cơ thể. Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu sản xuất protein leptin tái tổ hợp trong hệ thống vi khuẩn Escherichia coli nhằm tạo ra nguồn nguyên liệu có chất lượng tốt cho các nghiên cứu phát triển các sản phẩm điều hòa thể trọng ở người. Việc biểu hiện ở mức cao protein leptin tái tổ hợp trong E. coli dẫn đến sự hình thành thể vùi. Vì vậy, việc nghiên cứu để tìm ra các điều kiện hòa tan và tái gấp cuộn protein leptin từ dạng thể vùi giữ vai trò then chốt trong toàn bộ quá trình sản xuất protein leptin tái tổ hợp từ E. coli. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, thể vùi leptin có thể hòa tan bằng dung dịch urea 2M pH 12,5, sau đó tái gấp cuộn bằng phương pháp pha loãng hoặc phương pháp thẩm tích. Sản phẩm tái gấp cuộn được khẳng định bằng điện di SDS-PAGE có khử và không khử cầu nối disulfide, điện di Native-PAGE kiểm tra cấu hình, xác định mức độ protein kết cụm thông qua OD340, xác định nồng độ protein bằng thuốc thử Bradford. Hiệu quả tái gấp cuộn của phương pháp pha loãng là 56,02% và phương pháp thẩm tích là 43,15%. Kết quả nghiên cứu này là tiền đề cho các nghiên cứu phát triển sản phẩm leptin tái tổ hợp sau này. | Nghiên cứu tái gấp cuộn Protein Leptin người tái tổ hợp từ thề vùi của Escherichia coli TẠP CHÍ SINH HỌC 2014, 36(1se): 54-61 NGHIÊN CỨU TÁI GẤP CUỘN PROTEIN LEPTIN NGƯỜI TÁI TỔ HỢP TỪ THỀ VÙI CỦA Escherichia coli Lê Mai Hương Xuân, Đặng Thị Phương Thảo*, Trần Linh Thước Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG tp. Hồ Chí Minh, *thaodp@. TÓM TẮT: Leptin là một hormone có bản chất protein, được tiết ra chủ yếu từ mô mỡ, có vai trò quan trọng trong điều hòa lượng thức ăn và quá trình tiêu hao năng lượng của cơ thể. Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu sản xuất protein leptin tái tổ hợp trong hệ thống vi khuẩn Escherichia coli nhằm tạo ra nguồn nguyên liệu có chất lượng tốt cho các nghiên cứu phát triển các sản phẩm điều hòa thể trọng ở người. Việc biểu hiện ở mức cao protein leptin tái tổ hợp trong E. coli dẫn đến sự hình thành thể vùi. Vì vậy, việc nghiên cứu để tìm ra các điều kiện hòa tan và tái gấp cuộn protein leptin từ dạng thể vùi giữ vai trò then chốt trong toàn bộ quá trình sản xuất protein leptin tái tổ hợp từ E. coli. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, thể vùi leptin có thể hòa tan bằng dung dịch urea 2M pH 12,5, sau đó tái gấp cuộn bằng phương pháp pha loãng hoặc phương pháp thẩm tích. Sản phẩm tái gấp cuộn được khẳng định bằng điện di SDS-PAGE có khử và không khử cầu nối disulfide, điện di Native-PAGE kiểm tra cấu hình, xác định mức độ protein kết cụm thông qua OD340, xác định nồng độ protein bằng thuốc thử Bradford. Hiệu quả tái gấp cuộn của phương pháp pha loãng là 56,02% và phương pháp thẩm tích là 43,15%. Kết quả nghiên cứu này là tiền đề cho các nghiên cứu phát triển sản phẩm leptin tái tổ hợp sau này. Từ khóa: Chất biến tính, protein hòa tan, tái gấp cuộn, thể vùi. MỞ ĐẦU đã đạt xấp xỉ 16,3% số lượng người trưởng Leptin có vai trò quan trọng trong việc điều thành Việt Nam vào năm 2005 [13]. hòa thể trọng ở người. Thông qua vùng dưới đồi Leptin đã thể hiện được ưu thế .
đang nạp các trang xem trước
