tailieunhanh - Phân lập gien mã hóa Protein vận chuyển Lipit ở cây đậu xanh

Bài viết trình bày kết quả phân lập gien LTP, gien mã hóa Protein vận chuyển Lipit ở cây đậu xanh địa phương của tỉnh Cao Bằng. Để nắm chi tiết nội dung nghiên cứu bài viết. | Phân lập gien mã hóa Protein vận chuyển Lipit ở cây đậu xanh 31(1): 92-96 T¹p chÝ Sinh häc 3-2009 PH¢N LËP GiEN M HãA PR«TªIN VËN CHUYÓN LIPÝT ë C¢Y §ËU XANH NGUYÔN Vò THANH THANH Tr−êng ®¹i häc Khoa häc, §¹i häc Th¸i Nguyªn CHU HOµNG MËU §¹i häc Th¸i Nguyªn C¸c protein vËn chuyÓn lipÝt LTP (Lipid tr×nh bµy ë b¶ng 1: Transfer Proteins - LTP) lµ protein cã liªn quan B¶ng 1 tíi dÆc tÝnh chÞu kh« h¹n ë thùc vËt. LTP cã CÆp måi nh©n gien LTP khèi l−îng ph©n tö kho¶ng 9,12 kDa vµ cã 8 ph©n tö xystein lµm nhiÖm vô t¹o ra 4 cÇu nèi NhiÖt ®isulfit [5]. LTP cã kh¶ n¨ng xóc t¸c tíi sù vËn ’ ’ ®é Måi Tr×nh tù måi (5 -3 ) chuyÓn phètpholipit gi÷a c¸c líp mµng cña tÕ g¾n bµo [2, 3] vµ cã thÓ hç trî viÖc t¹o ra líp s¸p måi hoÆc líp biÓu b× gióp thùc vËt b¶o vÖ, ph¶n øng Xu«i atggctagcctgaaggttgc 56oC vµ ®¸p øng l¹i nh÷ng thay ®æi cña m«i tr−êng Ng−îc ttacttgatgttagcgcagtt 56oC [3, 5]. Trong nh÷ng n¨m gÇn ®©y, cã nhiÒu c«ng 2. Ph−¬ng ph¸p tr×nh nghiªn cøu vµ ph©n lËp gien LTP tõ c©y ADN tæng sè ®−îc t¸ch chiÕt theo ph−¬ng Arabidopsis thaniana L. [1], Zea mays L. [8], ph¸p Gawel vµ Jarnet (1991) cã c¶i tiÕn [4]. Triticum L. [7], Vigna radiata L. [6] vµ Oryza Nh©n gien LTP b»ng kü thuËt PCR. PCR sativa L. [9]. ®−îc tiÕn hµnh víi tæng thÓ tÝch ph¶n øng 50 µl Dùa vµo tr×nh tù cña gien mT ho¸ protein gåm: ADN mÉu (50 ng/µl) 4 µl, måi (10 pM) LTP ®T c«ng bè trªn Ng©n hµng gien Quèc tÕ 4 µl, dNTP (2,5 mM) 4 µl, MgCl2 (25 mM) 5 µl, víi mT sè AY300807, chóng t«i ®T thiÕt kÕ cÆp Taq polymeraza (5 unit/µl) 0,8 µl, buffer PCR måi ®Æc hiÖu ®Ó khuÕch ®¹i gien mT ho¸ protein (10X) 5 µl, H2O khö ion 27,2 µl. LTP cña ®Ëu xanh b»ng kü thuËt PCR, nh»m phôc vô cho viÖc nghiªn cøu c¸c gièng ®Ëu xanh Chu tr×nh nhiÖt bao gåm c¸c b−íc sau: 94oC cã kh¶ n¨ng chèng chÞu víi ®iÒu kiÖn bÊt lîi cña - 3 phót; 94oC - 50 gi©y, 56oC - 1 phót, 72oC - 1 m«i tr−êng. §o¹n gien LTP ®−îc nh©n lªn b»ng phót 30 gi©y lÆp l¹i 30 chu k×; 72oC - 10 phót vµ ph−¬ng ph¸p PCR