tailieunhanh - Chuyển nạp gen HIV-1 p24 vào lạp thể cây cà chua (Solanum Lycopersicum L.) bằng phương pháp bắn gen

Nghiên cứu chuyển nạp gien HIV-1 p24 vào lạp thể cây cà chua (Solanum lycopersicum) cùng với gien chọn lọc aadA kháng spectinomycin và streptomycin được thực hiện bằng cách bắn gien vào lá thật và lá mầm. Hepta adaptor được dùng trong những nghiên cứu chuyển gien. Sau ba ngày bắn gien, mẫu được cắt thành những miếng 3 × 3 mm. Lá thật đặt trên môi trường MS vitamin B5 có bổ sung zeatin 2,0 mg/l, IAA 0,2 mg/l, 50 mg/l spectinomycin; và lá mầm đặt trên môi trường MS vitamin B5 có bổ sung BA 2,0mg/l, IAA1,0mg/l, Kinetin 0,5 mg/l, 50 mg/l spectinomycin. Tăng dần nồng độ spectinomycin lên đến 300 mg/l qua những lần cấy chuyền. Phân tích PCR gien aadA và gien HIV-1 p24 cho thấy có sự có mặt của băng DNA khuếch đại tương ứng 250 bp, 700 bp trong các dòng cà chua chuyển gien. Kỹ thuật Southern blot phân tích gien HIV-1 p24 tái tổ hợp trong bộ gien lạp thể cây cà chua ở dạng không đồng nhất vì cho hai băng DNA khuếch đại tương ứng 5,8 kb của lạp thể chuyển gien và 3,5 kb của lạp thể không chuyển gien. | Chuyển nạp gen HIV-1 p24 vào lạp thể cây cà chua (Solanum Lycopersicum L.) bằng phương pháp bắn gen TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 242-248 CHUYỂN NẠP GEN HIV-1 P24 VÀO LẠP THỂ CÂY CÀ CHUA (Solanum lycopersicum L.) BẰNG PHƯƠNG PHÁP BẮN GEN Phạm Đức Trí*, Nguyễn Thị Thanh, Nguyễn Hữu Hổ Viện Sinh học nhiệt đới, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam, (*)phamductri75@ TÓM TẮT: Nghiên cứu chuyển nạp gien HIV-1 p24 vào lạp thể cây cà chua (Solanum lycopersicum) cùng với gien chọn lọc aadA kháng spectinomycin và streptomycin được thực hiện bằng cách bắn gien vào lá thật và lá mầm. Hepta adaptor được dùng trong những nghiên cứu chuyển gien. Sau ba ngày bắn gien, mẫu được cắt thành những miếng 3 × 3 mm. Lá thật đặt trên môi trường MS vitamin B5 có bổ sung zeatin 2,0 mg/l, IAA 0,2 mg/l, 50 mg/l spectinomycin; và lá mầm đặt trên môi trường MS vitamin B5 có bổ sung BA 2,0mg/l, IAA1,0mg/l, Kinetin 0,5 mg/l, 50 mg/l spectinomycin. Tăng dần nồng độ spectinomycin lên đến 300 mg/l qua những lần cấy chuyền. Phân tích PCR gien aadA và gien HIV-1 p24 cho thấy có sự có mặt của băng DNA khuếch đại tương ứng 250 bp, 700 bp trong các dòng cà chua chuyển gien. Kỹ thuật Southern blot phân tích gien HIV-1 p24 tái tổ hợp trong bộ gien lạp thể cây cà chua ở dạng không đồng nhất vì cho hai băng DNA khuếch đại tương ứng 5,8 kb của lạp thể chuyển gien và 3,5 kb của lạp thể không chuyển gien. Từ khóa: Solanum lycopersicum, chuyển gien vào lục lạp, gien aadA, giene HIV-1 p24, promoter RRN. MỞ ĐẦU Với việc tiếp cận kỹ thuật hiện đại trong công tác chuyển gen lục lạp, nghiên cứu sản Từ những năm cuối thế kỷ 20, hướng xuất protein kháng nguyên HIV-1 p24 từ thực chuyển gen vào lục lạp cây trồng đã được các vật là hướng nghiên cứu đang được nhắm đến. nhà khoa học quan tâm vì những thuận lợi của Trong nghiên cứu này, chúng tôi thực hiện nó. Obembe et al. (2010), Wang et al. (2009) chuyển nạp gen HIV-1 p24 vào lạp thể cây cà [11, 17] đã