tailieunhanh - Tạo dòng và biểu hiện hIGF-1 (Human Insulin-Like Growth Factor 1) trong E. coli
hIGF-1 (human Insulin-like Growth Factor 1) là nhân tố tăng trưởng do gan tiết ra dưới sự kích thích của hormone tăng trưởng GH. hIGF-1 được chỉ định để điều trị bệnh lùn ở trẻ do thiếu hụt hIGF-1 và được sử dụng để kích thích sự phát triển khối lượng cơ ở các vận động viên thể dục thể thao. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng, hIGF-1 có khả năng kiểm soát lượng glucose trong máu ở bệnh nhân đái tháo đường type 1 và type 2, có tác động tích cực đến một số bệnh thần kinh như bệnh alzheimer, một số bệnh tim mạch và nhiều nghiên cứu ứng dụng chức năng của hIGF-1 vẫn đang được tiến hành. Với mục tiêu thu nhận lượng lớn hIGF-1 nhằm mục đích phục vụ điều trị bệnh và nghiên cứu, nhóm chúng tôi tiến hành sản xuất rhIGF-1 trên hệ thống tế bào vi khuẩn E. coli. Đầu tiên, chúng tôi tiến hành tạo dòng và biểu hiện protein hIGF-1. Gen mã hóa cho hIGF-1 được gắn chèn vào plasmid pET-22b để tạo thành plasmid pET22b-IGF1. Vector tái tổ hợp được kiểm tra bằng các phương pháp PCR, enzyme cắt giới hạn và giải trình tự. Plasmid pET22b-IGF1 được biến nạp vào chủng tế bào E. coli Origami (DE3) để biểu hiện protein mục tiêu. Protein rhIGF-1 được cảm ứng biểu hiện bằng IPTG, kết quả SDS-PAGE và Western blot cho thấy có vạch protein rhIGF-1 trên bản điện di và trên bản phim. Chúng tôi đã biểu hiện thành công rhIGF-1 trong tế bào E. coli. Kết quả này là cơ sở để chúng tôi tiếp tục phát triển nghiên cứu các bước tiếp theo gồm lên men, tinh chế và kiểm tra hoạt tính rhIGF-1 thu nhận được. | Tạo dòng và biểu hiện hIGF-1 (Human Insulin-Like Growth Factor 1) trong E. coli TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(3SE): 78-83 TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN hIGF-1 (HUMAN INSULIN-LIKE GROWTH FACTOR 1) TRONG E. coli Dương Long Duy, Đặng Thị Phương Thảo*, Trần Linh Thước Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG tp. Hồ Chí Minh, (*)thaodp@ TÓM TẮT: hIGF-1 (human Insulin-like Growth Factor 1) là nhân tố tăng trưởng do gan tiết ra dưới sự kích thích của hormone tăng trưởng GH. hIGF-1 được chỉ định để điều trị bệnh lùn ở trẻ do thiếu hụt hIGF-1 và được sử dụng để kích thích sự phát triển khối lượng cơ ở các vận động viên thể dục thể thao. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng, hIGF-1 có khả năng kiểm soát lượng glucose trong máu ở bệnh nhân đái tháo đường type 1 và type 2, có tác động tích cực đến một số bệnh thần kinh như bệnh alzheimer, một số bệnh tim mạch và nhiều nghiên cứu ứng dụng chức năng của hIGF-1 vẫn đang được tiến hành. Với mục tiêu thu nhận lượng lớn hIGF-1 nhằm mục đích phục vụ điều trị bệnh và nghiên cứu, nhóm chúng tôi tiến hành sản xuất rhIGF-1 trên hệ thống tế bào vi khuẩn E. coli. Đầu tiên, chúng tôi tiến hành tạo dòng và biểu hiện protein hIGF-1. Gen mã hóa cho hIGF-1 được gắn chèn vào plasmid pET-22b để tạo thành plasmid pET22b-IGF1. Vector tái tổ hợp được kiểm tra bằng các phương pháp PCR, enzyme cắt giới hạn và giải trình tự. Plasmid pET22b-IGF1 được biến nạp vào chủng tế bào E. coli Origami (DE3) để biểu hiện protein mục tiêu. Protein rhIGF-1 được cảm ứng biểu hiện bằng IPTG, kết quả SDS-PAGE và Western blot cho thấy có vạch protein rhIGF-1 trên bản điện di và trên bản phim. Chúng tôi đã biểu hiện thành công rhIGF-1 trong tế bào E. coli. Kết quả này là cơ sở để chúng tôi tiếp tục phát triển nghiên cứu các bước tiếp theo gồm lên men, tinh chế và kiểm tra hoạt tính rhIGF-1 thu nhận được. Từ khóa: E. coli, protein tái tổ hợp, rhIGF-1. MỞ ĐẦU bào đích thông qua thụ thể chuyên biệt IGF1R (Insulin-like .
đang nạp các trang xem trước
