tailieunhanh - Thiết kế thư viện ADNc chịu hạn ở lúa và phân lập gen NLI-IF1 bằng kỹ thuật sàng lọc phép lai đơn trong tế bào nấm men

Cơ sở dữ liệu về trình tự promoter đã chứng minh trình tự ADN đích CCTCCTCC có mặt phổ biến trong các promoter cảm ứng với điều kiện stress của các gen chức năng liên quan đến stress như hạn, mặn và lạnh. Ngoài ra, các nghiên cứu phân tích chức năng của hai promoter cảm ứng với stress cho thấy promoter JRC0332 biểu hiện đặc trưng trong điều kiện lạnh và promoter JRC0528 biểu hiện trong điều kiện mặn, hạn, lạnh và có mặt ABA. Cả hai promoter này đều có chứa trình tự đích. Trong nghiên cứu này, thư viện ADNc xử lí hạn từ ARN tổng số của giống lúa Niponpare đã được thiết kế và sử dụng cho mục đích sàng lọc gen. Chúng tôi đã sàng lọc gen từ thư viện ADNc bằng phương pháp lai phân tử trong tế bào nấm men (Yeast One Hybrid Assay) sử dụng 2 trình tự 50 nucleotit nằm trong trình tự lõi của 2 promoter JRC0332 và JRC0528, chứa trình tự đích. Chúng tôi đã phân lập được một ADNc mã hóa nhân tố phiên mã NLI-IF (Nuclear LIM interactor-interacting factor). Nghiên cứu in vivo trong tế bào nấm men đã cho thấy NLI-IF có khả năng tương tác đặc hiệu với trình tự đích. | Thiết kế thư viện ADNc chịu hạn ở lúa và phân lập gen NLI-IF1 bằng kỹ thuật sàng lọc phép lai đơn trong tế bào nấm men TẠP CHÍ SINH HỌC, 2012, 34(1): 114-122 THIẾT KẾ THƯ VIỆN ADNc CHỊU HẠN Ở LÚA VÀ PHÂN LẬP GEN NLI-IF1 BẰNG KỸ THUẬT SÀNG LỌC PHÉP LAI ĐƠN TRONG TẾ BÀO NẤM MEN Nguyễn Duy Phương, Trần Tuấn Tú, Phạm Xuân Hội* Viện Di truyền nông nghiệp, (*) TÓM TẮT: Cơ sở dữ liệu về trình tự promoter đã chứng minh trình tự ADN đích CCTCCTCC có mặt phổ biến trong các promoter cảm ứng với điều kiện stress của các gen chức năng liên quan đến stress như hạn, mặn và lạnh. Ngoài ra, các nghiên cứu phân tích chức năng của hai promoter cảm ứng với stress cho thấy promoter JRC0332 biểu hiện đặc trưng trong điều kiện lạnh và promoter JRC0528 biểu hiện trong điều kiện mặn, hạn, lạnh và có mặt ABA. Cả hai promoter này đều có chứa trình tự đích. Trong nghiên cứu này, thư viện ADNc xử lí hạn từ ARN tổng số của giống lúa Niponpare đã được thiết kế và sử dụng cho mục đích sàng lọc gen. Chúng tôi đã sàng lọc gen từ thư viện ADNc bằng phương pháp lai phân tử trong tế bào nấm men (Yeast One Hybrid Assay) sử dụng 2 trình tự 50 nucleotit nằm trong trình tự lõi của 2 promoter JRC0332 và JRC0528, chứa trình tự đích. Chúng tôi đã phân lập được một ADNc mã hóa nhân tố phiên mã NLI-IF (Nuclear LIM interactor-interacting factor). Nghiên cứu in vivo trong tế bào nấm men đã cho thấy NLI-IF có khả năng tương tác đặc hiệu với trình tự đích. Từ khóa: chịu hạn, lai nấm men, nhân tố phiên mã, NLI, thư viện ADNc. MỞ ĐẦU khiển (nhân tố phiên mã) là có hai vùng hoạt Cách tiếp cận hướng nghiên cứu về stress động (domain): vùng hoạt hoá các protein chức thực vật trên thế giới hiện nay đang tập trung năng (activation domain) và vùng liên kết vào việc phân lập và nghiên cứu đặc tính một (binding domain) với các trật tự ADN đặc hiệu tập hợp đầy đủ các gen liên quan đến bất lợi (cis-acting element) trên vùng điều khiển của môi .