tailieunhanh - Phát hiện các gien mã hóa Hemolysin bền nhiệt và không bền nhiệt của Vibro Parahaemolyticus bằng phương pháp PCR

Bài viết trình bày ứng dụng phương pháp PCR để xác định các gien TLH và TDH của các chủng cho phép nhận diện các chủng mang gien gây bệnh. bài viết để nắm chi tiết nội dung bài viết. | Phát hiện các gien mã hóa Hemolysin bền nhiệt và không bền nhiệt của Vibro Parahaemolyticus bằng phương pháp PCR 42 25(4): 42-46 T¹p chÝ Sinh häc 12-2003 Ph¸t hiÖn c¸c gien m hãa hemolysin bÒn nhiÖt vµ kh«ng bÒn nhiÖt cña Vibrio parahaemolyticus b»ng ph−¬ng ph¸p PCR NguyÔn Hoµng Uyªn, NguyÔn ChÝ ThuËn, NguyÔn ThÞ Thanh Lîi, NguyÔn ThÞ Hång H¹nh ViÖn C«ng nghÖ sinh häc Vibrio parahaemolyticus lµ vi khuÈn gram trong 8-16 giê. Ph©n lËp Vibrio spp. trªn m«i ©m khu tró trong m«i tr−êng tù nhiªn ven biÓn. tr−êng TCBS. §Þnh tªn dùa trªn c¸c ®Æc ®iÓm Vi khuÈn nµy cã kh¶ n¨ng g©y thµnh dÞch bÖnh sinh lý sinh hãa b»ng test thö API-20E. víi nhiÒu ®èi t−îng h¶i s¶n nu«i nh− t«m, cua, b) Kü thuËt PCR hÇu, , Mét sè chñng cã kh¶ n¨ng g©y bÖnh ë ADN tæng sè cña vi khuÈn ®−îc t¸ch chiÕt ng−ßi [2]. Ph−¬ng ph¸p ph©n lo¹i vi sinh vËt dùa vµ lµm s¹ch theo Promega [6]. KiÓm tra ®é s¹ch theo ®Æc ®iÓm sinh lý vµ chØ tiªu sinh hãa, cã trªn gel agaroza 1%, ®Öm TAE 1X. thÓ dÔ dµng ph¸t hiÖn V. parahaemolyticus, nh−ng kh«ng ph©n biÖt ®−îc c¸c chñng mang CÆp måi Vp tlh-1 dïng ®Ó nh©n gien tlh c¸c gien g©y bÖnh. KÕt qu¶ nghiªn cøu bé gien ®−îc thiÕt kÕ dùa trªn tr×nh tù gien (tlh) cña V. cña V. parahaemolyticus ®O x¸c ®Þnh ®−îc gien parahaemolyticus No M36437 [8]: tlh-1: 5' - mO hãa hemolysin kh«ng bÒn nhiÖt (tlh) mO hãa AAA GCG GAT TAT GCA GAA GCA CTG - protein TLH vµ lµ gien ®Æc hiÖu loµi [8], gien 3' ; tlh-2: 5'- GCT ACT TTC TAG CAT TTT mO hãa hemolysin bÒn nhiÖt (tdh) mO hãa CTC TGC -3'. CÆp måi Vptdh-2 dïng ph¸t hiÖn protein TDH liªn quan ®Õn nguån gèc g©y c¸c gien tdh ®−îc thiÕt kÕ dùa trªn tr×nh tù gien tdh bÖnh nhiÔm khuÈn, viªm loÐt d¹ dµy cña ng−êi cña V. parahaemolyticus No M10069 [4] : tdh- [1]. ViÖc øng dông ph−¬ng ph¸p PCR ®Ó x¸c 1: 5’-GCT TAC AGC TTG GTA TGC C-3’; tdh- ®Þnh c¸c gien tlh vµ tdh cña c¸c chñng V. 2: 5’-GGA GAT AGA AGA AAC CTT CC-3’. parahaemolyticus cho phÐp nhËn diÖn c¸c Ph¶n øng PCR nh©n gien víi thÓ tÝch