tailieunhanh - Quan sát sự biểu hiện của Protein ngoại lai trong tế bào nấm men nhờ Protein phát huỳnh quang ECFP

Bài viết nghiên cứu quan sát sự biểu hiện của Protein ngoại lai trong tế bào nấm men nhờ Protein phát huỳnh quang ECFP thông qua các chủng vi sinh vật và điều kiện nuôi cấy; Plasmit pC-Z-Ste dùng để biểu hiện Protein dung hợp ECFP-Protein A-Ste. | Quan sát sự biểu hiện của Protein ngoại lai trong tế bào nấm men nhờ Protein phát huỳnh quang ECFP 26(2): 30-34 T¹p chÝ Sinh häc 6-2004 QUAN S¸T Sù BIÓU HIÖN CñA PROTEIN NGO¹I LAI TRONG TÕ BµO NÊM MEN NHê PROTEIN PH¸T HUúNH QUANG ECFP NguyÔn ®øc hoµng, trÇn linh th−íc Tr−êng ®¹i häc Khoa häc tù nhiªn, §HQG Tp. HCM Mitsuyoshi Ueda, Atsuo Tanaka §¹i häc Kyoto, NhËt B¶n §Ó theo dâi vµ ®Þnh vÞ sù biÓu hiÖn cña c¸c Saccharomyces cerevisiae. protein trong tÕ bµo hoÆc ®Ó ph¸t hiÖn nh÷ng thay ®æi m«i tr−êng hay c¸c t−¬ng t¸c protein, I. PH¦¥NG PH¸P nghiªn cøu ngµy nay ng−êi ta th−êng sö dông c¸c gien m5 hãa cho c¸c protein cã kh¶ n¨ng ph¸t huúnh 1. C¸c chñng vi sinh vËt vµ ®iÒu kiÖn nu«i quang. HÇu hÕt c¸c gien m5 hãa cho c¸c protein cÊy ph¸t huúnh quang ®−îc sö dông réng r5i hiÖn nay cã nguån gèc tõ GFP (green fluorescent Escherichia coli DH5α [F-, Φ80lacZ∆M15, protein) cña søa Aequorea victoria nh− ECFP recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+), phoA, supE44, (enhanced cyan fluorescent protein), EYFP λ-, thi-1, gyrA96, relA1] ®−îc nu«i cÊy ë 37oC (enhanced yellow fluorescent protein), EGFP trong m«i tr−êng Luria-Bertani (LB) [1% (enhanced green fluorescent protein) [4, 5]. trypton (Difco, Mich., USA), 0,5% yeast extract NhiÒu chiÕn l−îc kh¸c nhau ®5 ®−îc sö (Difco) vµ 1% NaCl] cã bæ sung 100µg/ml dông sao cho sù biÓu hiÖn cña gien sÏ t¹o ra ampixillin khi cÇn, ®−îc sö dông lµm tÕ bµo chñ protein môc tiªu ®−îc dung hîp víi ®Çu C hay ®Ó nh©n b¶n plasmit. Saccharomyces cerevisiae ®Çu N cña GFP [4]. Sù biÓu hiÖn cña gien môc MT8-1 (MATα, ade, his3, leu2, trp1, ura3) tiªu sÏ ®−îc theo dâi b»ng kÝnh hiÓn vi huúnh ®−îc nu«i cÊy ë 30oC trong m«i tr−êng YPD quang mµ kh«ng cÇn ph¶i cè ®Þnh tÕ bµo hay [1% yeast extract, 2% polypepton (Difco) vµ 2% ph¸ tÕ bµo, nhê vËy lµm gi¶m kh¶ n¨ng t¹o ra glucoza] hoÆc m«i tr−êng SD [0,67% yeast nh÷ng d−¬ng tÝnh gi¶. Ngoµi ra, protein dung nitrogen base (YNB) (Difco), 2% glucoza], ®−îc hîp GFP kh«ng g©y .