tailieunhanh - Áp dụng kỹ thuật SSCP (single strand conformation polymorphism) để phát hiện đột biến trên gen pbp2b ở các chủng streptococcus pneumoniae kháng penicillin

Ðề tài áp dụng kỹ thuật SSCP để phát hiện đột biến trên 3 trình tự của gene pbp2b ở các chủng S. pneumoniae kháng penicillin. Trước hết, chúng tôi xác định một số chỉ tiêu của kỹ thuật để đạt độ phân tích tốt nhất cho các trình tự đã nêu. Các chỉ tiêu này bao gồm: tác nhân biến tính, hàm lượng DNA, nồng độ gel polyacrylamide, phương pháp nhuộm). Sau đó áp dụng quy trình với các chỉ tiêu đã xác định được để phát hiện đột biến trên 20 chủng kháng penicillin so sánh với chủng nhạy. Kết quả cho thấy 18/20 chủng khảo sát có mang đột biến ít nhất trên 1 trong 3 trình tự. Hai chủng kháng còn lại không cho thấy có sự khác biệt với chủng nhạy, có thể do đột biến nằm ngoài khu vực khảo sát hoặc do độ nhạy của kỹ thuật. | Y Hoïc TP. Hoà Chí Minh * Taäp 6* Soá 2* 2002 Nghieân cöùu Y hoïc AÙP DUÏNG KYÕ THUAÄT SSCP (SINGLE STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM) ÑEÅ PHAÙT HIEÄN ÑOÄT BIEÁN TREÂN GEN PBP2B ÔÛ CAÙC CHUÛNG STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE KHAÙNG PENICILLIN Ñoã Thanh Ngaân1, Hoà Huyønh Thuøy Döông 2, Voõ Thò Chi Mai3 TOÙM TAÉT Streptococcus pneumoniae khaùng penicillin laø vaán ñeà lôùn, mang tính toaøn caàu trong lónh vöïc söùc khoûe con ngöôøi. Cô cheá khaùng chuû yeáu döïa treân söï bieán ñoåi caáu truùc caùc PBP (Penicillin Binding Protein) maø quan troïng nhaát laø PBP1A, 2B, 2X maõ hoùa bôûi caùc gene pbp töông öùng. Kyõ thuaät SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism – Tính ña hình trong caáu hình maïch ñôn cuûa nucleic acid) laø moät trong nhöõng kyõ thuaät thoâng duïng cho pheùp phaùt hieän söï toàn taïi cuûa caùc ñoät bieán ñieåm treân moät trình töï nucleic acid khi so saùnh vôùi trình töï chuaån (khoâng mang ñoät bieán). Ñeà taøi aùp duïng kyõ thuaät SSCP ñeå phaùt hieän ñoät bieán treân 3 trình töï cuûa gene pbp2b ôû caùc chuûng S. pneumoniae khaùng penicillin. Tröôùc heát, chuùng toâi xaùc ñònh moät soá chæ tieâu cuûa kyõ thuaät ñeå ñaït ñoä phaân tích toát nhaát cho caùc trình töï ñaõ neâu. Caùc chæ tieâu naøy bao goàm: taùc nhaân bieán tính, haøm löôïng DNA, noàng ñoä gel polyacrylamide, phöông phaùp nhuoäm). Sau ñoù aùp duïng quy trình vôùi caùc chæ tieâu ñaõ xaùc ñònh ñöôïc ñeå phaùt hieän ñoät bieán treân 20 chuûng khaùng penicillin so saùnh vôùi chuûng nhaïy. Keát quaû cho thaáy 18/20 chuûng khaûo saùt coù mang ñoät bieán ít nhaát treân 1 trong 3 trình töï. Hai chuûng khaùng coøn laïi khoâng cho thaáy coù söï khaùc bieät vôùi chuûng nhaïy, coù theå do ñoät bieán naèm ngoaøi khu vöïc khaûo saùt hoaëc do ñoä nhaïy cuûa kyõ thuaät. SUMMARY USING SSCP (SINGLE S TRAND CONFORMATION POLYMORPHISM) TECHNIQUE FOR DETECTION OF MUTATION OF PENICILLIN-RESISTANT STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE PBP2B GENE Ñoã Thanh Ngaân, Hoà Huyønh Thuøy Döông, Voõ Thò Chi Mai * Y Hoc TP. Ho Chi