tailieunhanh - Tối ưu mã di truyền để biểu hiện protein ORF2 của porcine circovirus trong Escherichia coli

Bài báo này trình bày một số kết quả về tối ưu hóa mã di truyền gen ORF2 của porcine circovirus và biểu hiện ORF2 trong vi khuẩn chủ Escherichia coli BL21(DE3). Gen ORF2 tối ưu đã được tách dòng thành công trong vector biểu hiện pET22b(+) và chuyển vào E. coli BL21(DE3). Sự biểu hiện của protein ORF2 trong E. coli BL21(DE3) đã được kiểm tra bằng điện di gel polyacrylamide và lai Western blot. | KHOA HỌC KỸ THUẬT THÚ Y TẬP XXIV SỐ 2 - 2017 TOÁI ÖU MAÕ DI TRUYEÀN ÑEÅ BIEÅU HIEÄN PROTEIN ORF2 CUÛA PORCINE CIRCOVIRUS TRONG ESCHERICHIA COLI Trương Quốc Phong1, Khuất Hữu Thanh1, Trần Thị Thanh Hà2, Đặng Vũ Hoàng2 TÓM TẮT Bài báo này trình bày một số kết quả về tối ưu hóa mã di truyền gen ORF2 của porcine circovirus và biểu hiện ORF2 trong vi khuẩn chủ Escherichia coli BL21(DE3). Gen ORF2 tối ưu đã được tách dòng thành công trong vector biểu hiện pET22b(+) và chuyển vào E. coli BL21(DE3). Sự biểu hiện của protein ORF2 trong E. coli BL21(DE3) đã được kiểm tra bằng điện di gel polyacrylamide và lai Western blot. Kết quả nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện biểu hiện của chủng tái tổ hợp cho thấy protein ORF2 tái tổ hợp được biểu hiện mạnh ở nồng độ chất cảm ứng IPTG 0,05 mM, nhiệt độ 37oC và thời gian cảm ứng là 4 giờ. Protein ORF2 tái tổ hợp đã được tinh sạch sử dụng sắc ký ái lực đặc hiệu đuôi His-tag. Protein ORF2 tái tổ hợp dạng tinh sạch này có thể được sử dụng làm kháng nguyên gây miễn dịch trên động vật tạo kháng thể đặc hiệu. Việc biểu hiện thành công protein kháng nguyên ORF2 của porcine circovirus trong E. coli BL21(DE3) sẽ giúp cung cấp nguồn kháng nguyên phục vụ cho các nghiên cứu ứng dụng trong tạo sinh phẩm chẩn đoán và phát triển vaccine thế hệ mới. Từ khóa: Escherichia coli, biểu hiện gen, mã di truyền tối ưu, ORF2, porcine circovirus 2 (PCV2) Codon optimization for expression of porcine circovirus ORF2 protein in Escherichia coli Truong Quoc Phong, Khuat Huu Thanh, Tran Thi Thanh Ha, Dang Vu Hoang SUMMARY In this paper, some results of codon optimization of porcine circovirus ORF2 gene and expression of ORF2 protein in Escherichia coli were presented. Optimal ORF2 gene was successfully cloned in expression vector pET22b (+) and transformed into E. coli BL21(DE3) host. Expression of ORF2 protein in E. coli BL21(DE3) was checked by polyacrylamide gel electrophoresis and Western blot method. Optimization studies of expression conditions .