tailieunhanh - Tạo dòng biểu hiện tiết và khảo sát khả năng sử dụng đuôi CBM3a tinh chế Endoglucanse A trong Bacillus subtilis

Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng hệ thống plasmid pHT để khảo sát tinh chế protein chỉ thị CelA (endoglucanase A) dung hợp với CBM3a dưới dạng tiết trên Bacillus subtilis WB800N. Kết quả khảo sát cho thấy protein CelA được tiết ra môi trường nuôi cấy và có thể tinh chế thông qua việc gắn kết của CBM3a lên cơ chất Regenerated Amorphous Cellulose (RAC). Nghiên cứu này làm tiền đề cho các nghiên cứu sâu hơn về khả năng ứng dụng CBM3a làm đuôi tinh chế protein tái tổ hợp trên hệ thống biểu hiện B. subtilis. | TAÏP CHÍ PHAÙT TRIEÅN KH&CN, TAÄP 19, SOÁ T3- 2016 Tạo dòng biểu hiện tiết và khảo sát khả năng sử dụng đuôi CBM3a để tinh chế Endoglucanse A trong Bacillus subtilis Nguyễn Hoàng Ngọc Phương Nguyễn Thành Phước Phạm Lương Thắng Nguyễn Đức Hoàng Trần Linh Thước Phan Thị Phượng Trang Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM (Bài nhận ngày 27 tháng 07 năm 2015, nhận đăng ngày 06 tháng 05 năm 2016) TÓM TẮT Các phương pháp tinh chế protein tái tổ hợp truyền thống có giá thành cao và không phù hợp khi áp dụng tinh chế protein dạng tiết với lượng thể tích lớn. Cellulose Binding Module 3a (CBM3a) thuộc phức hệ cellulosome từ chủng Clostridium thermocellum là một module có ái lực cao với cơ chất cellulose. Như vậy, nếu dung hợp protein mục tiêu với CBM3a và nhờ vào ái lực của CBM3a với cơ chất cellulose sẽ giúp tinh chế được protein mục tiêu với giá thành thấp. Các khảo sát ứng dụng CBM3a trong tinh chế protein tái tổ hợp trước đây đa phần đều thực hiện trong hệ thống biểu hiện nội bào. Việc thu nhận protein từ dịch tiết hoặc sử dụng chế phẩm thô từ dịch tiết sẽ giúp quá trình sản xuất protein tái tổ hợp trên quy mô lớn được thuận lợi và đạt hiệu quả kinh tế cao. Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng hệ thống plasmid pHT để khảo sát tinh chế protein chỉ thị CelA (endoglucanase A) dung hợp với CBM3a dưới dạng tiết trên Bacillus subtilis WB800N. Kết quả khảo sát cho thấy protein CelA được tiết ra môi trường nuôi cấy và có thể tinh chế thông qua việc gắn kết của CBM3a lên cơ chất Regenerated Amorphous Cellulose (RAC). Nghiên cứu này làm tiền đề cho các nghiên cứu sâu hơn về khả năng ứng dụng CBM3a làm đuôi tinh chế protein tái tổ hợp trên hệ thống biểu hiện B. subtilis. Từ khóa: Bacillus subtilis, Cellulose Binding Module, Clostridium thermocellum, endoglucanase A, tinh chế protein MỞ ĐẦU Để thủy phân cellulose, vi khuẩn kị khí, ưa nhiệt C. thermocellum sử dụng phức hệ cellulosome có cấu tạo gồm một giá đỡ CipA và các enzyme phụ trợ [3]. CBM3a là module .