tailieunhanh - Tạo dòng và khảo sát biểu hiện phiên bản GFP (Green Fluorescent Protein) cho khả năng biểu hiện tốt trong Bacillus subtilis

Trong nghiên cứu này, với mục tiêu phát triển một phiên bản GFP phù hợp cho Bacillus subtilis, chúng tôi tiến hành tạo ra các đột biến điểm trên gen gfp+ nhằm loại bỏ các vị trí enzyme cắt thông dụng BamHI, XhoI giúp thuận lợi cho việc dòng hóa; đồng thời thay đổi các codon Y39N, N105T, I171V sao cho tương thích với B. subtilis. Kết quả cho thấy phiên bản GFP sau đột biến cho khả năng phát huỳnh quang tốt hơn và các vị trí enzyme cắt giới hạn nêu trên cũng đã được loại bỏ. | Science & Technology Development, Vol 18, 2015 Tạo dòng và khảo sát biểu hiện phiên bản GFP (Green Fluorescent Protein) cho khả năng biểu hiện tốt trong Bacillus subtilis Nguyễn Hoài Nam Phan Thị Phượng Trang Trần Linh Thước Nguyễn Đức Hoàng Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM ( Bài nhận ngày 12 tháng 12 năm 2014, nhận đăng ngày 12 tháng 08 năm 2015) TÓM TẮT Gen gfp mã hóa cho protein GFP (Green cho các chủng chủ khác gặp nhiều khó khăn Fluorescent Protein) có nguồn gốc từ sứa do tần suất sử dụng codon và khả năng gấp Aequorea victoria là protein chỉ thị được sử cuộn sau dịch mã của mỗi chủng chủ. Trong dụng rất phổ biến, do (i) sự biểu hiện được nghiên cứu này, với mục tiêu phát triển một nhận biết dễ dàng thông qua khả năng phát phiên bản GFP phù hợp cho Bacillus subtilis, huỳnh quang, (ii) không cần cơ chất hay chúng tôi tiến hành tạo ra các đột biến điểm cofactor, (iii) ít ảnh hưởng đến protein mục trên gen gfp+ nhằm loại bỏ các vị trí enzyme tiêu khi dung hợp. Nhiều biến thể của GFP đã cắt thông dụng BamHI, XhoI giúp thuận lợi được nghiên cứu và cải tiến, trong đó, cho việc dòng hóa; đồng thời thay đổi các superfolder GFP với các đặc tính có lợi như codon Y39N, N105T, I171V sao cho tương gấp cuộn nhanh, cấu trúc ổn định và phát thích với B. subtilis. Kết quả cho thấy phiên huỳnh quang mạnh đã cho thấy khả năng ứng bản GFP sau đột biến cho khả năng phát dụng rất lớn của protein này. Tuy nhiên, huỳnh quang tốt hơn và các vị trí enzyme cắt giới hạn nêu trên cũng đã được loại bỏ. superfolder GFP chỉ mới được phát triển trên Escherichia coli, việc ứng dụng phiên bản này Từ khóa: Bacillus subtilis, pHT, GFP, superfolder GFP. MỞ ĐẦU Cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, việc tìm ra các gen chỉ thị hiệu quả là một trong những chiến lược hàng đầu. Gen chỉ thị mã hóa cho một protein mà sự biểu hiện của nó dễ dàng kiểm tra thông qua các kiểu hình đặc trưng. Một trong những gen chỉ thị được sử dụng khá phổ biến hiện nay là gfp có nguồn .