tailieunhanh - Biểu hiện nội bào và khảo sát khả năng tinh chế protein tái tổ hợp trong Bacillus subtilis sử dụng chỉ thị GFP

Bài viết nghiên cứu cho thấy tiềm năng của việc ứng dụng hệ thống vector pHT và chủng chủ an toàn B. subtilis để biểu hiện nội bào và tinh chế protein tái tổ hợp. nội dung chi tiết của tài liệu. | Science & Technology Development, Vol 18, 2015 Biểu hiện nội bào và khảo sát khả năng tinh chế protein tái tổ hợp trong Bacillus subtilis sử dụng chỉ thị GFP Phan Thị Phượng Trang Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM ( Bài nhận ngày 26 tháng 12 năm 2014, nhận đăng ngày 03 tháng 08 năm 2015) TÓM TẮT Bacillus subtilis và Escherichia coli là hai mô hình nghiên cứu đối với vi khuẩn Gram dương và Gram âm, đồng thời cũng là hai hệ thống vi khuẩn được sử dụng nhiều trong lĩnh vực công nghệ protein tái tổ hợp. So với E. coli, B. subtilis tuy có nhiều ưu điểm hơn, nhất là không lẫn nội độc tố trong sản phẩm, nhưng các nghiên cứu cũng như công nghệ nền phục vụ việc biểu hiện và tinh chế protein tái tổ hợp ở vi khuẩn Gram dương này vẫn chưa được quan tâm rộng rãi. Một số nghiên cứu trước đây đã phát triển thành công hệ thống vector pHT cho phép biểu hiện protein tái tổ hợp trong B. subtilis một cách hiệu quả nhưng vẫn chưa tiến hành tinh chế và thu nhận protein mục tiêu. Ở nghiên cứu này, chúng tôi tiếp tục sử dụng hệ thống pHT trong B. subtilis để đánh giá khả năng biểu hiện nội bào của protein chỉ thị GFP sau khi đã dung hợp với một đuôi tinh chế, đồng thời thử nghiệm khả năng tinh chế protein mục tiêu. Vector biểu hiện được thiết kế mang gen gfp dung hợp với vùng gen mã hóa đầu N của protein LysS (LysSN), đuôi His-tag và vị trí nhận biết đặc hiệu của TEV protease nhằm tăng cường khả năng biểu hiện protein mục tiêu cũng như giúp tinh chế và cắt bỏ đuôi dung hợp. Kết quả cho thấy vector này cho phép biểu hiện hiệu quả protein dung hợp LysSN6xHis-TEV-GFP trong B. subtilis, protein mục tiêu có thể được tinh chế thông qua cột 2+ Ni , đuôi dung hợp có khả năng được cắt bỏ hoàn toàn bởi TEV protease. Phân đoạn protein sau khi tinh sạch được xác định khối lượng phân tử bằng phân tích LC-MS cho thấy GFP tái tổ hợp đã được cắt bỏ đuôi dung hợp một cách chính xác và được thu nhận với độ tinh sạch cao. Nghiên cứu này cho thấy tiềm năng của việc ứng dụng hệ thống .