tailieunhanh - Biểu hiện gen HIV-1 p24 ở cây thuốc lá chuyển gen lục lạp

Chuyển gen HIV-1 p24 vào lục lạp đã được thực hiện thành công ở cây thuốc lá V2 (Virginia TBE2). Bằng các kỹ thuật PCR và Southern blot, các gen chuyển được chứng minh đã hòa nhập vào đúng vị trí thiết kế trên lục lạp, giữa gen trnfM và trnG. Kết quả Western blot cho thấy gen HIV-1 p24 biểu hiện ở các dòng thuốc lá chuyển gen. Hàm lượng protein p24 được ghi nhận qua phân tích ELISA cho thấy tích lũy ở mức cao nhất là 6,3 % tổng protein hòa tan (total soluble protein - TSP), ở các lá gần ngọn, và thấp nhất là 1,7% TSP. Protein được tinh sạch bằng phương pháp sắc ký lọc gel phân tử có độ tinh sạch là 9,694 lần, hiệu suất tinh sạch là 31,94%, tuy nhiên protein p24 mất hoạt tính nhiều sau khi tinh sạch. | Science & Technology Development, Vol 15, 2012 BIi 1000 bp phút, 72oC/2 phút ] 72oC/5 phút. Thành ph$n v t li u: - Nư c c t vô trùng Chu kỳ luân nhi t: 30 chu kỳ theo các bư c 13,8 µl Quy trình PCR khu ch ñ i ño n trình tC - 5 X GoTaq flexi buffer 5 µl ñ7c hi u trên 1000 bp - MgCl2 (2,5M) 2 µl Thành ph$n v t li u: - M%i xuôi (10 pmol) 1 µl - Nư c c t vô trùng - M%i ngư c (10 pmol) 1 µl - 10 X buffer 5 µl - dNTPs (10 mM) 1 µl - dNTPs (20 mM) 2 µl - AccuTaq 1 µl - DNA template 1 µl - M%i xuôi (10 pmol) 1 µl - GoTaq Polymerase 0,2 µl - DNA template 1 µl - Th tích cu i: 25 µl 38 µl Trang 53 Science & Technology Development, Vol 15, 2012 - M%i ngư c (10 pmol) 1 µl Phương pháp Southern blot không phóng x - DMSO 1 µl ñư c th c hi n d a trên quy trình c a McCabe 50 µl và cs (1997) [5]. DNA ñư c chi t tách t' lá - Th tích cu i theo b kit DNeasy c a QIAGEN (Đ c). Chu kỳ luân nhi t: 30 chu kỳ theo các bư c M0u DNA thu c lá (5µg DNA t&ng) ñư c sau: 98oC/30 giây [94oC/30 giây, 50-60oC/30 c t b ng enzym gi i h n BglII. Trên l c l p giây, 68oC/4 phút ] 68oC/10 phút. hoang d i s+ có kích thư c ño n c t có th lai S n ph!m PCR ñư c b o qu n " 4oC. v i probe là 3,5 kb và trên l c l p chuy n gen K t qu PCR ñư c ñi n di trên gel agarose là 5,8 kb. 0,8%, dung d ch ñ m TBE 1%, thang DNA H8n h p DNA sau khi c t ñư c ch y ñi n di chu!n 1 kb (Biolabs, Anh) [3,13]. trên gel agarose 0,8 % trong ñi n trư ng 25 V Phương pháp Southern blot qua ñêm (thang chu!n λ HindIII) và sau ñó Dùng m0u dò ñ c hi u có ñánh d u ñ phát ñư c chuy n lên màng lai Hybond (GE hi n trình t DNA c$n ki m tra thông qua lai HIV-1 P24 trnS ycf9 trnG Prrn Prrn TrbcL trmfM rps14 psaB TpsbA Healthcare). phân t . aada psaC Bglll Bglll Sơ ñ? 2. C u trúc gen bi n n p vào l c l p gi ñ nh và các v trí c t b ng enzyme c t gi i h n (rps14, trmfM, trnG, ycf9, trnS, psaB, psaC: các gen l p th thu c lá) M0u dò (probe) ñ c hi u .

• Sinh học
• Biểu hiện gen HIV 1 p24
• Cây thuốc lá chuyển gen lục lạp
• Cây thuốc lá
• Chuyển gen lục lạp
• Kỹ thuật PCR
• Kinh nghiệm xây dựng PCR/realtime PCR
• Phát triển PCR/realtime PCR
• Kỹ thuật sinh học phân tử
• Tác nhân vi sinh
• Phương tiện vi sinh
• Áp dụng PCR
• Real time PCR
• Real time PCR phòng thí nghiệm chẩn đoán
• Phòng thí nghiệm chẩn đoán
• PCR phòng thí nghiệm chẩn đoán
• Phát triển kỹ thuật PCR
• Xây dựng kỹ thuật PCR
• Các kỹ thuật sinh học phân tử
• Sinh học phân tử hiện đại
• Chẩn đoán bệnh nhiễm trùng
• ứng dụng PCR
• tài liệu về PCR
• nguyên lý PCR
• phản ứng PCR
• Phát hiện RSV ở bệnh nhi dưới 5 tuổi
• Phát hiện RSV
• Kỹ thuật realtime RT PCR
• Kỹ thuật RT PCR truyền thống
• Hô hấp do RSV
• Tạo chí y học
• Nghiên cứu y học
• Kỹ thuật real time PCR
• Kỹ thuật nested PCR
• Chẩn đoán loài plasmodium spp
• Phát triển kỹ thuật multiplex PCR
• Kỹ thuật multiplex PCR
• Gen chlamydia trachomatis
• Giải mã trình tự gen
• Quy trình multiplex PCR
• Tính chuyên biệt các cặp mồi trong phản ứng multiplex PCR
• Nồng độ primer cho phản ứng multiplex PCR phát hiện DNA
• Phương pháp phát hiện thịt heo trong thực phẩm
• Phương pháp phát hiện thịt bò
• Virut gây bệnh dịch tả vịt
• Đàn vịt sinh sản
• Kỹ thuật RT PCR
• Virut dịch tả vịt
• Virut DTV gây bệnh dịch tả vịt
• Tạp chí khoa học
• Tạp chí y dược
• Y dược quân sự
• Phòng chống não mô cầu
• Neisseria meningitidis
• Nhóm huyết thanh
• Tinh sạch ADN của N
• meningitidis
• Gen CtrA mã hóa
• Phân biệt thịt bò
• Kỹ thuật multiplex real time PCR
• Phân biệt thịt trâu
• Phân biệt thịt heo
• Quy trình multiplex real time PCR
• Multiplex real time PCR nhận diện DNA
• Kỹ thuật chẩn đoán
• PCR chẩn đoán
• PCR Real time
• Phòng thí nghiệm nghiên cứu
• Thiết lập kỹ thuật Taqman probe real time PCR
• Bệnh thận do B polyomavirus
• Định lượng nồng độ BKV ADN
• Taqman probe real time PCR
• Thành phần tối ưu của kỹ thuật real time PCR
• Sử dụng kỹ thuật Rapd Pcr
• Mối quan hệ di truyền
• Một số loài thuộc chi Calothrix Cyanobacteria
• Kỹ thuật Rapd Pcr
• Phản ứng RAPD PCR
• Luận văn Thạc sĩ Sinh học ứng dụng
• Công nghệ sinh học
• Quy trình phát hiện Microsporidia
• Viêm loét giác mạc
• Kỹ thuật Realtime PCR
• sản phẩm PCR
• xác định kiểu gen của HCV
• thử nghiệm RT real time PCR
• đặc hiệu vùng 5’ NC
• phương pháp nghiên cứu
• Virus viêm gan B
• Phương pháp PCR lồng
• Phương pháp tách chiết Hepatitis B virus DNA
• Phân biệt thịt bò trâu heo
• Kỹ thuật Multiplex Realtime PCR
• Quy trình multiplex realtime PCR nhận diện DNA
• Gian lận thương mại
• Quy trình multiplex realtime PCR
• Giá trị của kỹ thuật RT PCR
• Chẩn đoán virut Dengue
• Bệnh viện Quân y 103 năm 2017
• Ứng dụng kỹ thuật Real time PCR
• Xác định kiểu gen
• Bệnh viện đa khoa Đồng Tháp
• Ứng dụng kỹ thuật Realtime PCR
• Đột biến 455G A trên gen Fibrinogen Beta
• Bệnh nhân nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Nhồi máu cơ tim trẻ tuổi
• Ứng dụng kỹ thuật PCR RFLP
• Kỹ thuật PCR RFLP
• Xác định các đột biến A2142G
• Gene 23s rRNA
• Đề kháng clarithromycin
• Vi khuẩn Helicobacter pylori
• Tạp chí nghiên cứu y học
• Phát triển kỹ thuật multiplex real time PCR
• Taqman probe cải tiến
• Phát hiện HPV nguy cơ thấp
• Độ nhạy cao
• Hiệu quả của kỹ thuật PCR
• Chẩn đoán lao phổi
• Điều trị bệnh lao
• Vi khuẩn lao Mycobacterium tuberculosis
• Bệnh viện Lao và Bệnh phổi Thái Nguyên