tailieunhanh - Sàng lọc vector biểu hiện kháng thể scFv-CH2 kháng CD20

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm lựa chọn vector biểu hiện kháng thể scFv-CH2 kháng CD20 và xác định khả năng liên kết của kháng thể scFv-CH2 với CD20. Bài viết nghiên cứu nghiên cứu sử dụng phương pháp cắt, gắn gen anti-CD20Fa vào 3 vector biểu hiện pET28a, pET30GB1, MPB; biến nạp, tách ADN plasmid và phương pháp biểu hiện protein (kháng thể) được tiến hành theo Sambrook và CS (2001), phương pháp ELISA và Western blot. | TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 3-2015 SÀNG LỌC HỆ VECTOR BIỂU HIỆN KHÁNG THỂ scFv-CH2 KHÁNG CD20 Trần Minh Đạo*; Phạm Thu Thùy*; Lê Quang Huấn** TÓM TẮT Mục tiêu: lựa chọn được vector biểu hiện kháng thể scFv-CH2 và kháng thể tạo ra có khả năng liên kết với kháng nguyên CD20. Phương pháp: nghiên cứu sử dụng phương pháp cắt, gắn gen anti-CD20Fa vào 3 vector biểu hiện pET28a, pET30GB1, MPB; biến nạp, tách ADN plasmid và phương pháp biểu hiện protein (kháng thể) được tiến hành theo Sambrook và CS (2001), phương pháp ELISA và Western blot. Kết quả: gen anti-CD20Fa đã gắn vào 3 vector và 3 vector đều có khả năng biểu hiện scFv-CH2. Tuy nhiên, vector pET28a biểu hiện kháng thể scFv-CH2 và kháng thể có hoạt tính liên kết với kháng thể cộng hợp cao nhất so với 2 vector pET28a và pET30GB1. Kháng thể scFv-CH2 tạo ra có khả năng liên kết với kháng nguyên CD20 thương mại và CD20 biểu hiện trên tế lympho B ác tính dòng Raji. Kết luận: cả 3 vector pET28a, pET30GB1 và MPB có khả năng biểu hiện scFv-CH2. Tuy nhiên, vector pET28a được lựa chọn làm vector biểu hiện scFv-CH2. Kháng thể scFv-CH2 tạo ra có khả năng liên kết với kháng nguyên CD20 thương mại và CD20 biểu hiện trên tế lympho B ác tính dòng Raji. * Tõ khãa: Sàng lọc vector; Kháng thể scFv-CH2; Kháng CD20. Screening Vector System Expressed Anti-CD20 scFv-CH2 Antibody Summary Objectives: To screen vector expressing anti- CD20 scFv-CH2 antibody and this antibody can associate with anti-CD20 the best. Methods: Using the methods of cutting, ligating anti-CD20Fa gene to 3 expression vector pET28a, pET30GB1, MPB; transformation, plasmid DNA extraction and protein expression methods (antibody) were carried out according to Sambrook et al (2001) and ELISA, Western blot method. Results: The anti-CD20Fa gene attached to three vectors and 3 vectors have the ability to express scFv-CH2. However, the vector pET28a expressed scFvCH2 antibody the best compared to the 2 vector MPB and pET30GB1. scFv-CH2 antibody can associate with trade