tailieunhanh - Thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR chẩn đồng thời vi khuẩn than và vi khuẩn dịch hạch

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR sử dụng 6 cặp mồi khuếch đại gen đích VrrA, pagA, capA và ypo2088, pla, caf1 chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis trên các chủng đã xác định có đầy đủ plasmid độc. Đây là cơ sở cho việc chế tạo kit multiplex PCR chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng và môi trường. | TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2015 THIẾT KẾ VÀ TỐI U HÓA PHẢN ỨNG MULTIPLEX PCR CHẨN ĐOÁN ĐỒNG THỜI VI KHUẨN THAN VÀ VI KHUẨN DỊCH HẠCH Nguyễn Văn An*; Nguyễn Thái Sơn*; inh Th Thu ng** TÓM TẮT Mục tiêu: thiết kế và tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR sử dụng 6 cặp mồi khuếch đại gen đích VrrA, pagA, capA và ypo2088, pla, caf1 chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis trên các chủng đã xác định có đầy đủ plasmid độc. Đây là cơ sở cho việc chế tạo kit multiplex PCR chẩn đoán đồng thời B. anthracis và Y. pestis từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng và môi trường. Vật liệu và phương pháp: chủng vi khuÈn (VK) than và dịch hạch lưu giữ tại Học viện Quân y được xác định là có đủ các plasmid chứa gen độc của hai VK. Các cặp mồi sử dụng để phát hiện gen VrrA, capA, pagA của B. anthracis và gen ypo 2088, pla, caf1 của Y. pestis được thiết kế dựa trên trình tự gen đã công bố trên Ngân hàng Gen. Chủng VK sau khi bất hoạt bằng nhiệt, tiến hành tách chiết theo thường quy của bộ kit QIAamp ADN mini kit (QIAGEN, Đức). Tối ưu hóa phản ứng multiplex PCR để đảm bảo phát hiện đồng thời các gen đích quan tâm bằng cách tối ưu hóa thành phần và chu trình nhiệt của phản ứng. Kết quả và kết luận: thiết kế và tối ưu hóa thành công phản ứng multiplex PCR chẩn đoán đồng thời VK than và dịch hạch, sử dụng 6 cặp mồi được thiết kế để khuếch đại 6 gen đích của 2 VK, trong đó 2 gen trên chromosom (VrrA, ypo2088) và 4 gen trên plasmid (capA, pagA, pla, caf1). * Từ khóa: Vi khuẩn than; Vi khuẩn dịch hạch; Multiplex PCR. Establishing a Novel Multiplex PCR to Simultaneously Detect Bacillus Anthracis and Yersinia Pestis Summary Objective: The study aimed to establish a novel multiplex PCR by using six new specific primer pairs targeting to the VrrA, pagA, capA and ypo2088, pla, caf1 genes of B. anthracis and Y. pestis. The assay then was used to develop a multiplex PCR kit for simultaneously detecting B. anthracis and Y. pestis which carried toxic plasmid genes from clinical and environment samples. .