tailieunhanh - Nghiên cứu phát hiện vi khuẩn edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ trên cá tra (pangasius hyphophthalmus) bằng phương pháp multiplex PCR

Trong nghiên cứu này, kỹ thuật PCR đa mồi (multiplex PCR) được áp dụng để định danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri từ các mẫu bệnh phẩm nghi ngờ thu thập tại tỉnh Đồng Tháp. DNA genome của Edwardsiella ictaluri được tách chiết và thu nhận bằng phương pháp Phenol: Choloroform: Isoamyl alcohol (25:24:1). | Kỷ yếu kỷ niệm 35 năm thành lập Trường ĐH ng nghiệp Th c ph m T h inh -2017) NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN VI KHUẨN Edwardsiella ictaluri GÂY BỆNH GAN THẬN MỦ TRÊN CÁ TRA (Pangasius hyphophthalmus) BẰNG PHƢƠNG PHÁP MULTIPLEX PCR Trần Hoàng Ngâu*, Nguyễn Thị Ngọc Bích, Lại Thị Thùy Dƣơng Trường Đại học ng nghiệp Th c ph m Thành phố H h inh * Email: ngauth@ Ngày nhận bài: 14/06/2017; Ngày chấp nhận đăng: 30/08/2017 TÓM TẮT Edwardsiella ictaluri là tác nhân chính gây bệnh gan thận mủ với tỉ lệ chết từ 90-100% trên cá tra (Pangasius hyphophthalmus). Vi khuẩn này phát triển chậm trên môi trường nuôi cấy tổng hợp nên thời gian phân lập và định danh thường kéo dài. Do đó, trong nghiên cứu này, kỹ thuật PCR đa mồi (multiplex PCR) được áp dụng để định danh vi khuẩn Edwardsiella ictaluri từ các mẫu bệnh phẩm nghi ngờ thu thập tại tỉnh Đồng Tháp. DNA genome của Edwardsiella ictaluri được tách chiết và thu nhận bằng phương pháp Phenol: Choloroform: Isoamyl alcohol (25:24:1). Kỹ thuật PCR đa mồi khuếch đại sản phẩm có kích thước là 191 bp (cặp mồi FserC/RserC) và 407 bp cặp mồi (EiFd/EiRs). Tỉ lệ phát hiện mẫu dương tính là 90%. Nồng độ DNA khuôn mẫu sử dụng là 20ng/µL. Kết quả này bước đầu hoàn thiện quy trình nghiên cứu sản xuất bộ kit PCR thương mại phát hiện Edwardsiella ictaluri gây bệnh gan thận mủ trên thủy hải sản. Từ khóa: Bệnh gan thận mủ, Cá tra, Edwardsiella ictaluri, Multiplex PCR. 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Cá tra (Pangasius hyphophthalmus) hiện nay đang là một trong các đối tượng thủy sản nuôi chủ lực ở nước ta. Theo báo cáo của Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn (NN&PTNT), tính đến ngày 30/11/2016, diện tích nuôi cá tra thương phẩm đạt ha, sản lượng đạt 1,047 triệu tấn, ước tính tổng giá trị xuất khẩu đạt 1,67 tỷ USD. Năm 2016, toàn khu vực đồng bằng sông Cửu Long có 108 cơ sở cho sinh sản nhân tạo cá tra, tập trung trọng điểm về sản xuất giống tại các địa phương như An Giang, Đồng Tháp, Cần Thơ [1]. Việc mở rộng quy mô nuôi công nghiệp với tốc độ phát