tailieunhanh - Phát triển kỹ thuật multiplex PCR phát hiện đồng thời hai gen đích của Chlamydia trachomatis

PCR là một kỹ thuật thường được áp dụng trong sàng lọc nhiễm khuẩn đường sinh dục do Chlamydia trachomatis (CT). Tuy nhiên, một số chủng CT không có plasmid nên các kỹ thuật PCR sử dụng DNA plasmid là trình tự đích sẽ cho kết quả âm tính giả. Nghiên cứu này phát triển một kỹ thuật multiplex PCR (mPCR) có thể phát hiện cả trình tự DNA plasmid và trình tự gen omp1 của CT nhằm khắc phục được hiện tượng âm tính giả ở trên. | TAP CHI SINH HOC 2016, 39(1): 108-114 Nguyen Nam Thang et al. DOI: PHÁT TRIỂN KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI HAI GEN ĐÍCH CỦA Chlamydia trachomatis Nguyễn Nam Thắng1*, Bùi Đức Độ1, Nguyễn Thị Hoa1, Trần Thị Hòa1, Phan Ngọc Quang1, Bùi Hương Dung1, Đồng Văn Quyền2 1 2 Trường Đại học Y Dược Thái Bình Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam TÓM TẮT: PCR là một kỹ thuật thường được áp dụng trong sàng lọc nhiễm khuẩn đường sinh dục do Chlamydia trachomatis (CT). Tuy nhiên, một số chủng CT không có plasmid nên các kỹ thuật PCR sử dụng DNA plasmid là trình tự đích sẽ cho kết quả âm tính giả. Nghiên cứu này phát triển một kỹ thuật multiplex PCR (mPCR) có thể phát hiện cả trình tự DNA plasmid và trình tự gen omp1 của CT nhằm khắc phục được hiện tượng âm tính giả ở trên. Từ 7 cặp mồi được thiết kế dựa trên trình tự gen omp1 và plasmid của CT, sau khi thử nghiệm trong các điều kiện khác nhau, cuối cùng hai cặp mồi CTM-F1R1 và CTP-F1R2 đã được lựa chọn để sử dụng trong kỹ thuật mPCR phát hiện đồng thời các trình tự đặc hiệu trên DNA plasmid (434 bp) và trên gen omp1 (153 bp). Sử dụng kỹ thuật mPCR, chúng tôi có thể phát hiện CT trong các mẫu bệnh phẩm nếu có 5 bản sao (hoặc hơn) của gen omp1 và/hoặc 5 bản sao (hoặc hơn) của plasmid. Kỹ thuật này đã được thử nghiệm trên 128 mẫu quết cổ tử cung và so sánh với kết quả của 2 kỹ thuật PCR khác. Kỹ thuật mPCR có độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đoán dương, giá trị tiên đoán âm đều là 100%. Ngoài ra, kỹ thuật mPCR của chúng tôi có thể loại trừ kết quả âm tính giả trong trường hợp chủng CT không có plasmid. Do đó, kỹ thuật này có thể được áp dụng trong chẩn đoán và/hoặc sàng lọc CT trong cộng đồng. Từ khóa: Chlamydia trachomatis, multiplex PCR, omp1, plasmid. MỞ ĐẦU Chlamydia trachomatis là vi khuẩn chỉ gây bệnh ở người, gram âm, không có khả năng di động và ký sinh nội bào bắt buộc. CT được chia thành 15 typ huyết thanh chính ký hiệu bằng chữ cái từ A-K, ngoài ra còn có