tailieunhanh - Phân tích di truyền từ một tế bào để phát hiện đột biến gây bệnh beta thalassemia bằng phương pháp minisequencing

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm hoàn thiện quy trình phát hiện các đột biến gây bệnh beta -thalassemia từ 1 tế bào bạch cầu bằng phương pháp minisequensing. nội dung chi tiết của tài liệu. | TẠP CHÍ Y - DƯỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 1-2015 PHÂN TÍCH DI TRUYỀN TỪ MỘT TẾ BÀO ĐỂ PHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN GÂY BỆNH BETA-THALASSEMIA BẰNG PHƢƠNG PHÁP MINISEQUENCING Trần Văn Khoa*; Ngô Trường Giang*; Đặng Tiến Trường* Nguyễn Đình Tảo* Triệu Tiến Sang*; Nguyễn Thu Hà**; Hoàng Đặng An Sinh* TÓM TẮT Mục tiêu: hoàn thiện quy trình phát hiện các đột biến gây bệnh beta -thalassemia từ 1 tế bào bạch cầu bằng phương pháp minisequensing. Đối tượng và phương pháp: tế bào bạch cầu lympho của 9 bệnh nhân (BN) hoặc người mang đột biến gen beta-globin được tách khỏi máu toàn phần bằng phương pháp ly tâm tỷ trọng dùng ficoll, lấy 1 bạch cầu dưới kính hiển vi soi nổi, sau đó ly giải tế bào, nhân gen beta-globin bằng nested PCR, chạy minisequensing, điện di tự động phát hiện đột biến gây bệnh đối chiếu với kết quả phân tích từ máu toàn phần bằng phương pháp ARMS-PCR và multiplex ARMS-PCR. Kết quả và kết luận: các đột biến trên đối tượng trong phạm vi nghiên cứu đều được phát hiện khi phân tích với 1 tế bào bạch cầu, phù hợp kết quả phân tích từ máu ngoại vi toàn phần để phục vụ cho chẩn đoán di truyền trước chuyển phôi. * Từ khóa: Beta-thalassemia; Một tế bào; Chẩn đoán di truyền tiền làm tổ; Minisequencing. Single Cell Genetic Analysis for Mutation Detection in Beta-thalassemia Using Minisequencing Method Summary Objectives: Setting up a protocol for detection of beta-thalsassemia induced mutations from unique lymphocyte using minisequencing method. Subjects and methods: 9 peripheral blood lymphocytes of beta-thalassemia patients or beta-globin mutation carriers were isolated using density gradient centrifugation with ficoll. One lymphocyte was taken using stereoscopic microscope, then lysised. Beta-globin gene was amplified with nested PCR. Minisequencing and electrophoresis were performed to detect mutations in comparison with ARMS-PCR and multiplex ARMS-PCR method. Results and conclusions: All kinds of common mutations in the subjects were detected using unique lymphocyte as same result