tailieunhanh - Ứng dụng kỹ thuật Multiplex PCR chẩn đoán Escherichia coli gây tiêu chảy ở người

Bài viết được nghiên cứu với mục tiêu nhằm phát hiện gen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủng E. coli phân lập từ bệnh nhân (BN) tiêu chảy bằng phản ứng multiplex-PCR. tài liệu. | T¹p chÝ y - d−îc häc qu©n sù sè 2-2018 ỨNG DỤNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR CHẨN ĐOÁN ESCHERICHIA COLI GÂY TIÊU CHẢY Ở NGƯỜI Nguyễn Đắc Trung*; Nguyễn Thị Thu Thái*; Trần Quang Cảnh** TÓM TẮT Mục tiêu: phát hiện gen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủng E. coli phân lập từ bệnh nhân (BN) tiêu chảy bằng phản ứng multiplex-PCR. Đối tượng và phương pháp: 4 chủng chuẩn E. coli (EPEC, EIEC, EHEC và EC) và 23 chủng E. coli phân lập từ BN tiêu chảy đã được tách ADN tổng số trực tiếp từ khuẩn lạc vi khuẩn. Khuếch đại gen eae, sxt và ipaH ở các chủng chuẩn E. coli bằng phản ứng PCR và multiplex-PCR. Sử dụng phản ứng multiplex-PCR với các cặp mồi tương tự để phát hiện đồng thời gen eae, sxt và ipaH từ ADN genome các chủng E. coli phân lập từ BN tiêu chảy. Kết quả và kết luận: khuếch đại thành công gen độc lực eae, sxt và ipaH ở các chủng chuẩn EPEC, EIEC và EHEC bằng phản ứng PCR và multiplex-PCR. Với phản ứng multiplex-PCR, đã xác định được 9/23 chủng E. coli phân lập từ BN tiêu chảy có mang gen độc lực. Trong đó 2 chủng vi khuẩn thuộc nhóm EPEC (mang gen eae), 4 chủng thuộc nhóm EIEC (mang gen sxt) và 3 chủng thuộc nhóm EHEC (mang đồng thời gen eae và sxt). * Từ khóa: E. coli; Multiplex-PCR; Gen eae, sxt, ipaH. Multiplex-PCR Assay for Identification of Human Diarrheagenic Escherichia coli Summary Objectives: To identify virulent gene of eae, sxt and ipaH in the strains of E. coli isolated from diarrhea patients by multiplex-PCR assay. Subjects and methods: Four E. coli strains (EPEC, EIEC, EHEC and EC) and 23 strains of E. coli isolated from diarrhea patients were subjected to extract total DNA from bacterial colonies. Amplification of eae, sxt and ipaH genes in the standard E. coli strains were carried out by PCR and multiplex PCR. Multiplex-PCR assays with similar primer pairs were used to simultaneously detect eae, sxt and ipaH genes from the genomic DNA of E. coli strains isolated from diarrhea patients. Results and conclusions: Eae, sxt and ipaH genes were successfully .