tailieunhanh - Khảo sát chọn lọc và tối ưu qui trình thử nghiệm hoạt tính pdgf (platelet-derived growth factor) người tái tổ hợp in vitro

Bài viết này trình bày về các kết quả khảo sát chọn lọc và tối ưu qui trình thử hoạt tính PDGF in vitro. Kết quả khảo sát cho thấy, qui trình thử nghiệm không thông qua phương thức đồng hoá tế bào, môi trường thử nghiệm không chứa FBS, mật độ tế bào đầu vào là 5×103 tế bào/giếng và thời gian tiến hành thử nghiệm là 36h, có độ ổn định (%CV | Phương pháp thứ nhất dựa vào hiện tượng ức chế kìm hãm. Phương pháp thứ hai đưa tế bào vào trạng thái tĩnh bằng cách gây đói trong môi trường chứa nồng độ huyết thanh thấp (0-2%). Mặc dù một số qui trình trước đây sử dụng phương thức đồng hoá tế bào đầu vào thông qua ức chế kìm hãm do tăng trưởng đến trạng thái bão hòa [2], các kết quả thực nghiệm của chúng tôi cho thấy, việc sử dụng tế bào ở trạng thái bão hoà (hình 1a,b) làm tế bào chết nhiều. Sau khi nuôi cấy bổ sung PDGF, tế bào bắt đầu tăng trưởng trở lại nhưng mật độ tế bào tăng không đáng kể so với lượng tế bào đầu vào: tăng đến lần ở qui trình và biến động nhiều ở qui trình . Khác biệt giữa lô xử lý PDGF và lô không xử lý PDGF nằm trong khoảng 1,5 đến 1,8 lần (hình 2c,d) sau 48h giờ nuôi cấy, điều này cho thấy tế bào thử nghiệm đáp ứng không cao với PDGF. Hơn thế nữa, kết quả xử lý thống kê ANOVA cho thấy trong khi qui trình thử nghiệm sử dụng tế bào đầu vào ở trạng thái bão hoà kết hợp đưa tế bào vào trạng thái tĩnh (qui trình hình 1a) có độ ổn định khá tốt thể hiện ở chỉ số %CV<10% thì qui trình thử nghiệm với tế bào đầu vào ở trạng thái bão hoà, bỏ qua giai đoạn đưa tế bào vào trạng thái tĩnh (qui trình hình 1b) cho thấy tính ổn định thấp %CV là 19%.