tailieunhanh - Tạo dòng và biểu hiện protein hGM-CSF trên tế bào CHO-K1

Trong nghiên cứu này, gene hgm-csf mã hóa cho protein hGM-CSF được chuyển vào trong tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc (CHO-K1 cells) và đánh giá khả năng biểu hiện protein. Trước tiên, gene được chèn vào plasmid đúng khung đọc mở ngay sau promoter CMV tại vị trí EcoRI và XhoI. Plasmid tái tổ hợp được sàng lọc bằng PCR khuẩn lạc với cặp mồi đặc hiệu, cắt giới hạn và giải trình tự. | TAP SINH HOC 2015, 37(1): 117-123 TạoCHI dòng và biểu hiện protein hGM-CSF DOI: TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN PROTEIN hGM-CSF TRÊN TẾ BÀO CHO-K1 Trương Hoàng Phụng, Ngô Thị Kim Hằng, Trần Văn Hiếu* Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG tp Hồ Chí Minh, *tvhieu@ TÓM TẮT: Nhân tố kích thích tạo cụm bạch cầu hạt và ñại thực bào người (hGM-CSF, human granulocyte-macrophage colony stimulating factor) là một cytokine có phổ tác dụng rộng trong cơ thể, từ các tế bào tiền thân tạo máu, tế bào tua, ñến tế bào cơ trơn, tế bào biểu mô và cả một số tế bào thần kinh. Sự glycosyl hóa, dù không ñóng vai trò trong tương tác với thụ thể nhưng có tác dụng làm tăng ñộ bền cho hGM-CSF ở ñiều kiện in vivo. Những sản phẩm hGM-CSF tái tổ hợp sử dụng rộng rãi hiện nay chủ yếu ñược sản xuất từ Escherichia coli và Saccharomyces cerevisiae, những loại tế bào chủ không có bộ máy biến ñổi sau dịch mã giống người. Trong nghiên cứu này, gene hgm-csf mã hóa cho protein hGM-CSF ñược chuyển vào trong tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc (CHO-K1 cells) và ñánh giá khả năng biểu hiện protein. Trước tiên, gene ñược chèn vào plasmid ñúng khung ñọc mở ngay sau promoter CMV tại vị trí EcoRI và XhoI. Plasmid tái tổ hợp ñược sàng lọc bằng PCR khuẩn lạc với cặp mồi ñặc hiệu, cắt giới hạn và giải trình tự. Plasmid tái tổ hợp sau quá trình kiểm tra ñược ñặt tên pcDNA-hGM. Sau ñó, plasmid tái tổ hợp ñưa vào tế bào CHO-K1 bằng phương pháp biến nạp sử dụng cationic lipid và nuôi chọn lọc bằng kháng sinh geneticin. Kết quả cho thấy, gene hgm-csf ñã ñược dòng hoá vào plasmid tại vị trí EcoRI và XhoI. Dịch môi trường nuôi tế bào CHO-K1/ pcDNA-hGM cho thấy khả năng kích thích sự tăng sinh của dòng tế bào TF-1, dòng tế bào sống phụ thuộc hGM-CSF. Như vậy, plasmid tái tổ hợp pcDNA-hGM ñã ñược cấu trúc thành công và dòng tế bào mang gene tái tổ hợp CHO-K1/pcDNA-hGM biểu hiện protein hGM-CSF có hoạt tính. Đây là nghiên cứu ñầu tiên về biểu hiện hGM-CSF trên