tailieunhanh - Chuyển gen shrunken 2 (Sh2) mã hóa enzyme ADP-glucose pyrophosphorylase vào một số dòng ngô bằng phương pháp chuyển gen thông qua Agrobacterium tumefaciens

Mục đích của nghiên cứu này là chuyển gen Sh2 vào một số dòng ngô và tạo cây ngô chuyển gen mang gen đích góp phần cho các nghiên cứu tiếp theo về vai trò của gen này trong việc tăng cường tổng hợp tinh bột ở cây ngô. | TAP CHI SINH HOC 2014, 36(1): 99-109 Chuyển gen Shrunken 2 vào một số dòng ngô DOI: CHUYỂN GEN SHRUNKEN 2 (Sh2) MÃ HÓA ENZYME ADP-GLUCOSE PYROPHOSPHORYLASE VÀO MỘT SỐ DÒNG NGÔ BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GEN THÔNG QUA Agrobacterium tumefaciens Trần Thị Lương, Nguyễn Thị Thu, Nguyễn Thùy Ninh, Nguyễn Đức Thành* Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH&CN Việt Nam, *nguyenducthanh_pcg@ TÓM TẮT: Gen Shrunken 2 (Sh2) ñã ñược xác ñịnh tham gia vào quá trình sinh tổng hợp tinh bột vì gen này mã hóa cho hai tiểu phần lớn của enzyme ADP-glucose pyrophosphorylase, một enzyme ñóng vai trò quan trọng trong ñiều hòa sinh tổng hợp tinh bột ở nhóm cây ngũ cốc. Mục ñích của nghiên cứu này là chuyển gen Sh2 vào một số dòng ngô trồng và tái sinh cây chuyển gen mang gen ñích phục vụ cho nghiên cứu vai trò của gen Sh2 trong việc tăng cường tổng hợp tinh bột ở cây ngô. Các chủng Agrobacterium tumefaciens C58 và DHA105 mang vector chuyển gen pCambia1301/Ubi/Sh2 có chứa gen Sh2 và chuỗi khởi ñộng Ubiquitin ñặc thù cho cây một lá mầm ñược sử dụng ñể chuyển gen Sh2 vào phôi non của các dòng ngô. Phản ứng PCR nhân bản gen Ubi và Sh2 ñược tiến hành ñể kiểm tra sự có mặt của gen chuyển trong cây chuyển gen T0. Lai Southern và Northern ñược tiến hành ở các cây chuyển gen tương ứng T0 và T1 ñể kiểm tra sự sâm nhập vào hệ gen và sự thể hiện của gen Sh2 ở các cây chuyển gen. Đã tái sinh ñược cây từ các mô sẹo chuyển gen của sáu dòng ngô H95, H240, H26, H14, H4 và CML161 với hiệu suất chuyển gen từ 1,08 ñến 1,77. Chủng A. tumefaciens DHA105 cho hiệu suất chuyển gen cao hơn chủng C58 và ñạt từ 1,60 ñến 4,31%. Các cây chuyển gen có từ 1 ñến 3 bản sao gen chuyển nạp. Nhiều cây chuyển gen sinh trưởng và phát triển bình thường, cho bắp và hạt. Việc nghiên cứu ảnh hưởng của gen chuyển ñến sinh tổng hợp tinh bột ở các dòng ngô chuyển gen sẽ ñược tiến hành trong thời gian tới. Từ khóa: Agrobacterium tumefaciens, cây chuyển gen, dòng ngô, gen Shrunken 2 (Sh2), hiệu .