tailieunhanh - Nghiên cứu tối ưu điều kiện biểu hiện Interleukin 3 người dung hợp với pelb trong E. coli
Trong bài viết này, chúng tôi khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng biểu hiện của gen il-3 bao gồm chủng biểu hiện E. coli, các điều kiện lên men như môi trường, nồng độ chất cảm ứng, nhiệt độ biểu hiện, mật độ tế bào lúc cảm ứng và xác định trạng thái tồn tại của protein IL-3 được tổng hợp. | HOC 2016, 250-256 NghiênTAP cứu CHI tối ưuSINH điều kiện biểu hiện38(2): Interleukin-3 DOI: NGHIÊN CỨU TỐI ƯU ĐIỀU KIỆN BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-3 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI PelB TRONG E. coli Dương Thu Hương, Nguyễn Thị Quý, Đặng Thị Ngọc Hà, Lê Thị Thu Hồng, Trương Nam Hải* Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm KH & CN Việt Nam, *tnhai@ TÓM TẮT: Interleukin-3 người (IL-3) là một cytokine đa chức năng tham gia vào các quá trình tự đổi mới, nhân lên, biệt hóa và trưởng thành của nhiều loại tế bào máu. Sau khi đưa gen il-3 gắn thêm tín hiệu tiết pelB vào vector pET22b(+) và tiến hành biểu hiện ở chủng E. coli BL21, chúng tôi nhận thấy IL-3 được tổng hợp ở mức rất thấp và còn gắn với PelB. Để thuận tiện cho khâu tinh sạch, vấn đề then chốt là nghiên cứu tìm ra các điều kiện phù hợp làm tăng lượng IL-3 được tổng hợp, đồng thời cắt được PelB. Trong nghiên cứu này, chúng tôi so sánh khả năng sinh tổng hợp IL3 của các chủng E. coli BL21, JM109, Soluble và Rossetta2; sau đó tối ưu hóa điều kiện biểu hiện gen il-3 về thành phần môi trường, nhiệt độ, nồng độ IPTG, thời điểm cảm ứng và kiểm tra trạng thái tồn tại của IL-3. Kết quả thu được cho thấy gen il-3 biểu hiện tốt và ổn định nhất ở chủng E. coli JM109. Dưới các điều kiện lên men thích hợp trong môi trường LB, ở 25oC, cảm ứng 0,05 mM IPTG tại OD600=1, IL-3 biểu hiện tốt, cắt khỏi PelB và tồn tại ở trạng thái không tan trong tế bào chất. Sinh khối tế bào tăng lên khoảng 2,3 lần sau khi tối ưu. Kết quả này là tiền đề cho bước tinh sạch lượng lớn IL-3 cho nghiên cứu tính chất của protein. Từ khóa: Escherichia coli JM109, biểu hiện protein, IL-3, PelB. MỞ ĐẦU Interleukin-3 người (IL-3) là một cytokine có bản chất là glycoprotein, được xem là có phổ tác dụng rộng nhất trong hệ tạo máu. Nó tham gia vào quá trình tự đổi mới, nhân lên và biệt hóa của các tế bào nguồn tạo máu, hoạt hóa chức năng của các bạch cầu trưởng thành [9]. Việc sản xuất sinh phẩm IL-3 theo con đường tái tổ hợp không chỉ .
đang nạp các trang xem trước
