tailieunhanh - Báo cáo " RAPID DETECTION AND QUANTIFICATION OF THE FOODBORNE PATHOGENES BY REAL-TIME PCR "

RAPID DETECTION AND QUANTIFICATION OF THE FOODBORNE PATHOGENES BY REAL-TIME PCR | Tạp chí Công nghệ Sinh học 7 4 501-511 2009 PHÁT HIỆN VÀ ĐỊNH LƯỢNG NHANH MỘT SỐ VI SINH VẬT GÂY BỆNH TRONG THỰC PHẨM BẰNG REAL-TIME PCR Lê Thị Chi Nguyễn Quốc Bình Trung tâm Công nghệ sinh học Thành phố Hồ Chi Minh TÓM TẮT Chúng tôi đã nghiên cứu và sử dụng Real-Time PCR để phát hiện và định lượng nhanh một số vi sinh vật gây bệnh đường ruột chính ở người trong thực phẩm. Quy trình đã sử dụng một môi trường tăng sinh chung và một chương trình PCR sử dụng trực tiếp dịch tăng sinh với 5 cặp primer đặc hiệu cho 5 loài vi khuẩn gây bệnh trong thực phẩm là Escherichia coỉi Salmonella spp. shigella spp. Listeria monocytogenes và Bacillus cereus. Các primer được chọn đặc hiệu 100 với loài đích và không xảy ra phản ứng chéo với các loài khác. Phương pháp này đon giàn không cần ly trích tinh sạch DNA để thực hiện có độ nhạy cao phát hiện được từ 1 - 10 bản sao DNA phàn ứng khi được kiểm tra với vi khuẩn thuần. Độ nhạy phát hiện của phưong pháp là 1 - 10 CFU 25 g mẫu thực phẩm và sau khi tăng sinh 24 h thì mẫu nhiễm có hàm lượng vi sinh vật từ 107 - 109 CFU ml R2 0 998 kết quả định lượng này không chênh lệch nhiều so với phưong pháp đếm khuẩn lạc p 0 90 . Độ chính xác độ nhạy và độ đặc hiệu cao so với phương pháp truyền thống. Các giá trị trung binh này là 97 99 98 05 và 95 60 . Toàn bộ quá trình chỉ mất 4 - 30 h so với thời gian 5-7 ngày khi sử dụng phương pháp truyền thống. Từ khóa Bacillus cereus Escherichia coli Listeria monocytogenes Real-Time PCR Salmonella Shigella vi sinh vật gãy bệnh trong thực phâm GIỚI THIỆU Ngộ độc thực phẩm đã và đang là mối đe dọa đối với sức khỏe cộng đồng. Theo thống kê trong những năm gần đây bình quân hàng năm có khoảng 76 triệu người nhiễm bệnh và 5000 người chết Mead et al. 1999 . Theo thống kê của Trung tâm Kiểm dịch và Phòng bệnh Mỹ CDC từ năm 1993 đến năm 1997 xảy ra 2751 vụ ngộ độc thực phẩm ở Mỹ. Nguyên nhân được xác định cao nhất là do vi sinh vật gây nên chiếm từ 75 - 86 . Theo theo thống kê của Bộ Y tế trong năm 2008 Việt Nam có