tailieunhanh - Báo cáo "Biểu hiện Protein huỳnh quang xanh (GFP) trong tế bào động vật có vú nuôi cấy "

Biểu hiện Protein huỳnh quang xanh (GFP) trong tế bào động vật có vú nuôi cấy | Tạp chí Công nghệ Sinh học 7 3 313-318 2009 BIỂU HIỆN PROTEIN HUỲNH QUANG XANH GFP TRONG TẾ BÀO ĐỘNG VẬT CÓ VÚ NUÔI CẤỴ Nguyễn Hải Hà Lê Thị Thu Hiền Nông Văn Hải Viện Công nghệ sinh học TÓM TẮT Tế bào động vật có vú nuôi cấy đã được sử dụng rộng rãi làm cơ sờ sản xuất protein tái tổ hợp do khả năng biến đổi hậu dịch mã protein của chúng. Một số dòng tế bào bắt nguồn từ chuột hoặc người như tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc Chinese hamster ovary CHO tế bào thận chuột hamster baby hamster kidney-BHK hay tế bào thận phôi người human embryonic kidney-HEK thường được sử dụng để biểu hiện các protein phức tạp. Mặc dù số dòng tế bào khá đa dạng nhưng có đến gần 70 dược phẩm tái tổ hợp hiện nay được tạo ra từ tế bào CHO. Trong nghiên cứu này để thiết lập hệ biểu hiện gen trong tế bào CHO gen mã hóa protein huỳnh quang xanh green fluorescence protein GFP đã được chọn làm đôi tượng biểu hiện. Vector pEGFP-N2 mang cấu trúc biểu hiện gen gfp được đưa vào tế bào nhờ calcium phosphate Hoặc lipofectamin 2000. Bốn mươi tám giờ sau khi biến nạp biểu hiện của GFP trong tế bào đã được kiểm tra nhờ cường độ phát sáng của nó dưới kính hiển vi huỳnh quang số tế bào được biến nạp đạt khóảng 50 - 60 tồng số tế bào. Dòng tế bào chuyển gen ổn định biểu hiện mạnh GFP đã chọn lọc bằng kháng sinh geneticine và đặt tên CHO-S GFP. Các kết quả này đã cho thấy khả năng ứng dụng các kỹ thuật nuôi cấy tế bào hiện đại như biểu hiện tạm thời và phát triển dòng tế bào chuyển gen ổn định trong nghiên cứu biếu hiện các protein tái tổ hợp có hoạt tính sinh học trong hệ tế bào CHO. Từ khóa Biểu hiện gen protein huỳnh quang xanh GFP nuôi cấy tế bào động vật tế bào buồng trứng chuột hamster Trung Quốc CHO vector biếu hiện MỞ ĐẦU Trong 20 năm qua sản xuất các protein tái tổ hợp đã trở thành một công nghệ quan trọng tập chung chính vào các sản phẩm là dược phẩm sinh học để ứng dụng trong y học. Hầu hết các protein tái tổ hợp dùng để chữa bệnh là những phân tử phức tạp. Đe giữ được hoạt tính tự nhiên