tailieunhanh - Báo cáo " Biểu hiện gen Has mã hoá kháng nguyên Hemagglutinin (Ha) của virus cúm A/H5N1 trong Escherichia Coli "

Biểu hiện gen Has mã hoá kháng nguyên Hemagglutinin (Ha) của virus cúm A/H5N1 trong Escherichia Coli | Tạp chí Công nghệ Sinh học 7 2 185-192 2009 BIÊU HIỆN GEN HA5 MÃ HÓA KHÁNG NGUYÊN HEMAGGLUTININ HA CỦA VIRUS CÚM A H5N1 TRONG ESCHERICHIA COLI Đỗ Thị Huyền1 Bùi Hồng Vân3 Văn Thị Như Ngọc1 Trương Văn Dung2 Trương Nam Hải1 7 Viện Công nghệ sinh học 2Viện Thúy 3 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội TÓM TẮT Bệnh cúm gia cầm gây ra bởi virus thể độc lực cao là một bệnh truyền nhiễm nguy hiểm do có tốc độ lây lan nhanh và tỷ lệ gây chết cao trong đàn gia cầm nhiễm bệnh. Hiện nay chủng virus cúm A H5N1 là chủng virus gây ra dịch bệnh chủ yếu ở nhiều quốc gia trên thế giới trong đó có Việt Nam. Trong nghiên cứu này chúng tôi tiến hành biểu hiện toàn bộ gen haO mã hóa cho kháng nguyên HA5 của virus cúm A H5N1 trong tế bào E. coli BL21. Gen ha5-0 được thiết kế dung hợp với gen mã hóa cho protein thioredoxin trong vector pET22trx yà dưới hai dạng Ị Toàn bộ gen ha5-0 trừ bộ ba mở đầu và phần tín hiệu tiết 2 Thay thế đoạn đoạn peptide nối giữa hai tiểu phần HAI và HA2 bằng một đoạn polylinker ha5- -2 . Khả năng biểu hiện cùa chủng tái tổ hợp E. coli BL21 mang các dòng gen ha5-0 và ha5-l-2 được khảo sát trong môi trường LB với nhân tố chọn lọc ampicillin và chất cảm ứng IPTG. Ảnh hường của nồng độ chất cảm ứng IPTG được khảo sát ở các giá trị 0 0 05 0 1 0 2 0 4 0 6 0 8 1 1 5 và 2 mM. Khả năng biểu hiện của các dòng tế bào tái tổ hợp được khảo sát ờ các nhiệt độ 22 25 28 30 và 37 c. Kết quả thu được cho thấy protein dung hợp TrxHa5-0 và TrxHa5-l-2 có kích thước khoảng 66 kDa đã được biểu hiện tốt nhất trong tế bào E. coli dưới sự điều khiển của T7 lac promoter với chất cảm ứng IPTG và ở nhiệt độ cảm ứng là 25 c. Protein tái tồ hợp không được tổng hợp khi trong môi trường không có chất cảm ứng IPTG. Tuy nhiên nồng độ chất cảm ứng không ảnh hưởng nhiều đến mức độ biểu hiện gen cùa tế bào protein tái tổ hợp được cảm ứng biểu hiện tốt ngay ở nồng độ chất cảm ứng rất thấp là 0 05 mM và tăng lên không đáng kể ở các nồng độ cao hơn. Bên cạnh đó protein TrxHa5-1 - 2 có mức độ biểu .