tailieunhanh - Báo cáo " Biểu hiện lượng lớn protein sefA của Salmonella enterica Serovar enteritidis trong vi khuẩn Escherichia coli BL21"

Biểu hiện lượng lớn protein sefA của Salmonella enterica Serovar enteritidis trong vi khuẩn Escherichia coli BL21 | Tạp chí Công nghệ Sinh học 6 2 175-182 2008 BIÈU HIỆN LƯỢNG LỚN PROTEIN SEFA CỦA SALMONELLA ENTERICA SEROVAR ENTERITIDIS TRONG VI KHUẢN ESCHERICHIA CỮLIVLĨA Đỗ Thị Huyền1 Lê Quỳnh Giang1 Trần Ngọc Tân Tô Long Thành2 Trương Nam Hải1 lyịện Công nghệ sinh học 2Trung tâm Chẩn đoản Thủy Trung ương TÓM TẲT Kháng nguyên fimbriae SEF14 của s. Enteritidis đóng vai trò quan trọng trong việc kích thích hệ thống miễn dịch sản xuất lympho T và miễn dịch bảo hộ. Gen sefA mã hóa cho protein SefA- protein câu thành nên SEF14 không chứa trình tự mã hóa peptide tín hiệu đã được nhân lên băng PCR và tách dòng trong vector . Gen được tách dòng có 432 nucleotide tương đồng 99 3 với gen sefA của chủng s. Enteritidis PT4 - chủng gây ra phần lớn các vụ ngộ độc thực phâm ở người. Sau đó gen được đưa vào vector biếu hiện pET32a và biến nạp vào E. coỉi BL21 để biểu hiện gen. Trong chủng biểu hiện SefA được tạo ra với lượng lớn dưới dạng dung hợp chứa peptide Trx S-tag ở đầu N hexahistidine ở đầu c và được gọi tát là TrxSef. Protein này được biểu hiện tốt nhất ở 30 C hơn 500 mg 1 môi trường nhung một nứa số protein tồn tại dưới dạng thể vùi. Sử dụng nhiệt độ thấp trong quá ưình biểu hiện gen đã làm giảm lượng protein không tan tạo ra. Ờ 22 25 và 3O C hàm lượng TrxSef dạng tan được tổng hợp là tương đương nhau trên 200 mg 1 môi trường . Lượng TrxSct không tan tăng lên là do toe độ biêu hiện tăng. Tuy nhiên ở 25 c chủng tái tô hợp vẫn có the sinh trường được và lượng TrxSef tan cũng đạt được tương đối chiếm 76 TrxSef tổng số. Nồng độ 1PTG không ảnh hưởng tới sự sinh trưởng của tế bào nhưng ảnh hưởng không nhiều lắm đến sinh tông hợp TrxSef. Lượng lớn TrxSef được sinh ra khi tế bào được cảm ứng vơi 300 pM IPTG. Ó quy mô bình tam giác mức độ biếu hiện TrxSef phụ thuộc vào pha sinh trưởng của tể bào. Trong suốt pha log từ 0 đến 3 h sau cảm ứng TrxSef được tạo ra chiếm khoảng 60 mg 1 g te bào khô nhưng khi sự sinh trưởng của tế bào đạt đen pha cân bằng 4 h sau khi cảm ứng TrxSef được tổng hợp