tailieunhanh - Báo cáo " Chuyển gen gus vào đỉnh phôi hạt chín giống đậu tương ĐT12 thông qua Agrobacterium tumefaciens "

Chuyển gen gus vào đỉnh phôi hạt chín giống đậu tương ĐT12 thông qua Agrobacterium tumefaciens | Tạp chi Công nghệ Sinh học 5 4 471-478 2007 CHUYÊN GEN Gưs VÀO ĐỈNH PHÔI HẠT CHÍN GIỐNG ĐẬU TƯƠNG ĐT12 THÔNG QUA AGROBACTERIUM TUMEFACIENS Đinh Thị Phòng1 Nguyễn Thị Thư2 1 Viện Công nghệ sinh học 2Trường Trung học phổ thông Lê Hồng Phong Thành Phổ Nam Định TÓM TẮT Với mục đích nghiên cứu và hoàn thiện phương pháp chuyển gen vào giống đậu tương của Việt Nam thông qua Agrobacterium tumefaciens chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu kỹ thuật chuyển vector pPTN289 chứa gen gus intron vào giông đậu tương ĐT12 sử dụng hệ thống tái sinh cây thông qua đa chồi tạo từ đinh phôi hạt chín Sau khi khử trùng các hạt đậu tương được ngâm ngập băng nước cất vô trùng trong thời gian 24 h. Tách các đinh phôi đặt trên môi trường cảm ứng MS cơ bàn vitamin B5 3 5 mg 1 BAP và nuôi 72 h trong tối. Nhiễm các đỉnh phôi sau cảm ứng với chủng vi khuẩn EHA101 chứa vector pPTN289 ở các thời gian 1 5 2 20 và 26 h. Thời gian nhiễm khuẩn cho hiệu quà biến nạp gen gus tốt nhất là 2 h với tỷ lệ mẫu tạo cụm chồi là 47 và hiệu quà biểu hiện gen gus ở cây tái sinh in vitro đạt 12 8 . Tám dòng cây tái sinh in vitro có kí hiệu là T0ĐT12-1 T0ĐT12-2 T0ĐT12-3 TỌĐT12-4 T0ĐT12-5 T0ĐT12-6 T0ĐT12-7 T0ĐT12-8 từ các mẫu sau khi biến nạp gen gus đã được trồng ngoài nhà lưới tại Trại Thực nghiệm sinh học cổ Nhuể Từ Liêm Hà Nội. Các mẫu lá hoa và thân của 8 cây TO đều có biểu hiện màu xanh lam đặc trưng của gen gus pỉus. Đã thu được tồng số 330 hạt đậu tương từ 8 dòng TO. Phân tích mức độ biểu hiện cùa gen gus ớ các mẫu thân lá rễ hoa ở 10 dòng TI cho thấy gen gus có biểu hiện ờ 8 dòng trong đó 5 dòng biểu hiện gen gus ở lá 1 dòng biểu hiện gus ờ cá thân và rễ 2 dòng biểu hiện ở cá lá và hoa. Như vậy gen gus đã được di truyền từ thế hệ cây T0 sang thế hệ TI. Từ khóa Agrobacterium tumefaciens đa chồi đậu tương gen gus đinh phôi hạt chín tải sình cây MÓ ĐÂU Đậu tương Giycine max L. Merrill là cây trồng truyền thống được trồng ở gần 200 nước trên thế giới. Trong đỏ diện tích trồng cây đậu tương tập trung chủ yếu ở Hoa Kỳ .