tailieunhanh - Báo cáo " Tách dòng và biểu hiện gen mã hoá polymerase của virus viêm gan B trên bề mặt tế bào Saccharomyces cerevisiae"

Tách dòng và biểu hiện gen mã hoá polymerase của virus viêm gan B trên bề mặt tế bào Saccharomyces cerevisiae | Tạp chí Công nghệ Sinh học 5 4 419-424 2007 TÁCH DÒNG VÀ BIẺU HIỆN GEN MẢ HÓA POLYMERASE CỦA VIRUS VIÊM GAN B TRÊN BÈ MẶT TÉ BÀO SACCHAROMYCES CEREVISIAE Nguyễn Thị Phuong Trang1 Kim Young-Ho2 Đinh Duy Kháng3 Đồng Văn Quyền3 y Tiện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật Việt Nam 2Tnrờng Đại học Suwon Hàn Quốc 3 Viện Công nghệ sinh học Việt Nam TÓM TẮT Mặc dù là virus DNA nhưng sự sao chép cùa virus viêm gan B HBV vẫn phải cần đến hoạt tính phiên mã ngược cùa polymerase. Polymerase được mã hóa bới gen poỉ. Đã có nhiều nỗ lực nhằm biểu hiện gen pol nhưng đến nay các đặc tính sinh hóa cú a protein mã ho ả bới gen này vẫn chưa được làm sáng tó do không thể thu nhận đù lượng protein hòa tan có hoạt tỉnh sinh học để phục vụ cho mục đlch nghiên cứu. Trong công trình này chủng tôi nghiên cửu biểu hiện polymerase của HBV trên bề mặt nấm men Saccharomyces cerevisiae. Toàn bộ gen pol có chiều dài 2496 bp được khuếch đại bàng PCR tách dòng vào vector pGEM-Teasy và được giải trình tự. Gen poỉ sau đó được đưa vào vector biểu hiện pYDl và biển nạp vào s. cerevisiae bằng xung điện. Đế biểu hiện gen poỉ các tế bào nấm men mang plasmid tái tồ hợp chứa gen này được nuôi lắc ở 30 C trên môi trường YNB-CAA có bố sung 2 glucose và được cảm ứng bang 2 galactose ở 20 C tiếp tục lắc trong thời gian 12 - 72 h. Ket quả phân tích bằng SDS-PAGE cho thay polymerase tái tổ hợp có kích thước khoảng 107 kDa được tiết ra trên bề mật của tế bào nấm men và liên kết với tế bào bẳng 2 cầu nối disulfide ở vị trí aga2p và agalp. Mức độ biểu hiện cúa polymerase Pol tăng dần theo thời gian nuôi cấy và mạnh nhất ỡ thời điểm 60 h sau cám ứng. Ket quả này được khắng định lại bảng Western blot sử dụng kháng thề đặc hiệu kháng V5-epitope. Thành công của nghiên cứu này là một bước quan trọng trong việc nghiên cứu câu trúc và chức năng cùa HBV Pol tiến tới phát triển loại thuốc điều trị HRV mới dựa trên việc bât hoạt polymerase cua virus. Từ khóa Biêu hiện gen polymerase s. cerevisiae virus viêm gan ĩì MÓ ĐÀU Viêm gan