tailieunhanh - Báo cáo "Tinh sạch và xác định tính chất của phytase tái tổ hợp "

Tinh sạch và xác định tính chất của phytase tái tổ hợp | Tạp chỉ Công nghệ Sinh học 5 3 331-336 2007 TINH SẠCH VA XÀC ĐỊNH TINH CHAT CUA PHYTASE TAI TO HỢP Đỗ Thị Ngọc Huyền1 Nguyền Thị Hồng Hà1 Trương Nam Hải2 Nguyễn Thùy Châu1 1 Viện Cơ điện nông nghiệp và Công nghệ sau thu hoạch 2 Viện Công nghệ Sinh học TÓM TẮT Phytate là dạng dự trữ chính của phosphorus và chiếm hơn 80 frong tổng số phosphorus có ở một số thực vật. Chúng hoạt động như tác nhân kháng dinh dưỡng bằng việc hình thành phức không hòa tan với protein và ion kim loại trong đường tiêu hóa dẫn đến ngăn cản sự hấp thụ muối khoáng của động vật dạ dày đơn. Bởi vậy việc thêm phytase vào thức ăn gia súc không chỉ nâng cao hiệu quả tận dụng phosphate mà còn làm giảm sự ô nhiễm phosphorus ở các khu chăn nuôi tập trung. Gen phyC mẫ hóa cho phytase từ vi khuẩn Baciỉỉus subtiỉis BI đã được biểu hiện thành công trong E. coll BL21. Trong công trình này chúng tôi nghiên cứu các tính chất của enzyme tái tổ hợp nhăm mục đích sử dụng chúng trong thức ăn chăn nuôi. Kết quả phytase tái tổ hợp được tinh sạch qua cột sắc ký Hig-tag có khôi lượng phân tử khoảng 47 kDa trẽn điện di gel polyacrylamide. pH và nhiệt độ tối ưu cho phytase tái tổ hợp hoạt động là 6 5 và 55 C khi bổ sung 1 mM CaCl2. Khi nghiên cứu ảnh hưởng của các chất khử và ion kim loại đã chỉ ra enzyme này bị ức chế mạnh mẽ bởi EDTA và ion Cu2 . Việc thêm -Ca2 vào PhyC đã giúp tăng khả năng bền nhiệt cùa nó. Enzyme này nhạy cảm với pepsin ngược lại rất bền với trypsin. Giá trị Km với cơ chất sodium phytate là 0 48 mM Vmax 180 pmol phút. Từ khóa E. coli BL2Ỉ Phytate phytase tải tổ hợp tính chất tinh sạch MỞ ĐẰU Một trong số những nguyên tố khoáng đa ỉượng rất cần cho sự phát triển của người và vật nuôi là phosphorus bởi vì phosphorus cũng như nitơ là những thành phần cơ bản tạo nên nucleic acid và cảc hợp chất sinh học khác. Tuy nhiên phosphorus không cỏ chu trình tái tạo lại bởi trái đất như nitơ. ở cơ thể người cũng như cơ thể động vật phosphorus và các nguyên tổ khoáng cần thiết khác được cung cấp chủ yếu qua con