tailieunhanh - Báo cáo " Biểu hiện gen mã hoá lipase (Lipa) từ chủng Bacillus subtilis F "

Biểu hiện gen mã hoá lipase (Lipa) từ chủng Bacillus subtilis F Nghiên cứu phát triển các protein dược phẩm tái tổ hợp. Nghiên cứu phát triển các vaccine tái tổ hợp dùng trong nông nghiệp và y tế. Nghiên cứu phát triển các bộ sinh phẩm trên cơ sở protein tái tổ hợp và kháng thể dùng trong nông nghiệp, y tế và bảo vệ môi trường. | Tạp chi Công nghệ Sinh học 5 1 41-46 2007 BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA LIPASE LIPA TỪ CHỦNG BACILLUS SUBTILIS FS2 Nguyễn Hổng Thanh Phùng Thu Nguyệt Trương Nam Hải Viện Cồng nghệ Sình học TÓM TẮT Gen mă hóa lipase A lipA của chủng B. subtiỉis FS2 phân lập từ nguồn nước mắm của Việt Nam được tách dòng dựa vào kỹ thuật PCR. Một đoạn DNA chứa toàn bộ khung đọc mở ORF mã hóa lipase A với kích thước 543 bp được tách dòng bởi vector pBlueScriptSK trong tế bào E. coỉi DH5a. Đoạn gen mẫ hóa lipase A được thu lại từ plasmid tái tổ hợp pBlueLipA sau khi xử lý plasmid này bàng hai enzyme cắt hạn chế BamHI và Xhoỉ. Đoạn gen này được đưa vào vector biểu hiện pET22b tạo thành plasmid tái tổ hợp pETLipA và được biến nạp vào té bào . coli BL21. Dòng khuẩn lạc mang gen ngoại lai được lựa chọn và nuôi cấy trong môi trường LB vói 1 mM chất cảm ứng 1PTG. Lipase A tái tổ hợp cổ kích thước khoảnẹ 24 kDa được biểu hiện ở dạng protein ngoại bào sau 2 h cảm ứng và biểu hiện mạnh nhất sau 5 h với nong độ protein tương ứng khoảng 0 5 mg ml. Protein tái tổ hợp có chửa 6 gốc histidine His vởi pl 9 2 được tinh sạch qua cột sắc ký Ni2 HiTrap 5 ml. Sản phẩm protein tinh sạch được kiểm Ưa hoạt tính enzyme trên đĩa thạch có chứa 0 1 tributyrin. Hoạt tính riêng cùa enzyme được xác định là Ư mg. Từ khóa Baciỉỉus subtilis FS2 biểu hiện gen lipase A tinh sạch protein lìpA tải tổ hợp MỞ ĐẦU Lipase triacylglycerol acylhydrolase EC là một enzyme xúc tác cho sự thủy phân triacylglycerol thành glycerol và các acid béo. Đồng thời enzyme này còn có khả năng tham gia vào các quá trình tổng hợp tạo nên ester vả các quá trình ester hóa. Chúng có khả năng hoạt động bền vững trong môi trường có nhiệt độ cao và dung môi hữu cơ Bomscheuer et al. 1994 . Do vậy lipase có tiềm năng ứng dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp như các quá trình xử lý các hợp chất hữu cơ sản xuất chất tày rửa quá trình tổng hợp các hợp chất bề mặt công nghiệp hóa dầu công nghiệp thực phẩm công nghiệp sản xuất giấy công nghiệp .