tailieunhanh - Nghiên cứu sử dụng các phương pháp sinh học phân tử xác định các kiểu gen hệ nhóm ABO cá thể

Những nghiên cứu về các dòng cADN mã hoá kháng nguyên nhóm máu ABO [6] đã xác định đ-ợc trình tự đoạn gen ABO với kích th-ớc 1000bp. Đồng thời qua những nghiên cứu này, ng-ời ta chứng minh đ-ợc rằng gen mã hoá kháng nguyên A và B có một số gốc bazơ khác nhau ở những vị trí xác định. Điều này dẫn đến những thay đổi một số trình tự axit amin làm cho hoạt tính của A và B-transferase khác nhau. Sự khác nhau đó đã đ-ợc các tác giả tìm ra tại nucleotit 700 của. | TCNCYH 23 3 2003 NGHIÊN cứu sử DỤNG CÁC PHƯƠNG PHÁP SINH HỌC PHÂN TỬ XÁC ĐỊNH CÁC KIÊU GEN HỆ NHÓM ABO CÁ THỂ Nghiêm Xuân Dũng1 Trần Minh Đôn1 Lương Thị Yến1 và Lê Đức Đào2 1 Cục Kỳ thuật Hóa - Sinh Tổng cục Khoa học kỳ thuật và Công nghệ - Bộ Công an. 2 Viện Sốt rét Ký sinh trùng và Côn trùng trung ương Kỹ thuật huyết học xác định được 4 nhóm máu là A B O AB. Sử dụng kĩ thuật PCR và các loại enzym cắt giới hạn có thể xác định kiểu gen của hệ kháng nguyên này cho phép xác định được 6 trạng thái gen là AA BB OO AB AO BO. Phương pháp mới sử dụng có đô nhạy rất cao có thể xác định được các mẫu ADN từ vết máu nước bọt tóc nên được áp dụng có hiệu quả trong công tác giám định hình sự. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Những nghiên cứu về các dòng cADN mã hoá kháng nguyên nhóm máu ABO 6 đã xác định được trình tự đoạn gen ABO với kích thước 1000bp. Đổng thời qua những nghiên cứu này người ta chứng minh được rằng gen mã hoá kháng nguyên A và B có một số gốc bazơ khác nhau ở những vị trí xác định. Điều này dần đến những thay đổi một số trình tự axit amin làm cho hoạt tính của A và B-transferase khác nhau. Sự khác nhau đó đã được các tác giả tìm ra tại nucleotit 700 của gen B. Tại vị trí này bazơ G được thay thế bằng bazơ A có ở thể dại. Vị trí đột biến này tạo ra điểm nhận biết của enzym giới hạn Alul. Đổng thời nghiên cứu trên gen O chứng minh sự vắng mặt của bazơ G ở vị trí 258 do đó gen mã hoá tổng hợp protein không có hoạt tính transferase. Đột biến này tạo thêm một vị trí nhận biết nữa đối với gen O bởi enzym giới hạn KpnI. Tiếp theo những nghiên cứu trên Carll Ladd và cộng sự 1996 2 đã đưa ra một phương pháp nhằm xác định kiểu gen nhóm máu ABO. Sử dụng đôi mổi thứ nhất DHF1 và DHR2 bằng kỹ thuật PCR nhóm tác giả đã nhân đoạn gen ABO tạo ra một sản phẩm có kích thước 209 210bp. Sản phẩm này sẽ mang vị trí đột biến tại bazơ 258 nếu allen O có mặt. Đôi mổi tiếp theo DHF3 và DHR3 sẽ nhân đoạn gen ABO tạo ra một sản phẩm có kích thước 175bp. Sản phẩm này mang vị trí đột biến tại bazơ 700 nếu