tailieunhanh - BÁO CÁO " XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH REAL TIME RT-PCR VỚI CHẤT NHUỘM EVAGREEN ĐỊNH LƯỢNG VÀ ĐỊNH CHỦNG VIRUT GÂY HỘI CHỨNG RỐI LOẠN SINH SẢN VÀ HÔ HẤP TRÊN HEO "

Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp trên heo (PRRS, bệnh tai xanh) do virut (PRRSV) gây nhiều thiệt hại kinh tế. PRRSV gồm 2 dòng, châu Âu (EU) và Bắc Mỹ (NA), trong đó có chủng Trung Quốc - một biến chủng từ dòng Bắc Mỹ. Trong nghiên cứu này, quy trình real time RT-PCR sử dụng chất phát huỳnh quang EvaGreen với cặp mồi F7 và R7 được thiết kế trên vùng ORF7 cho phép phân biệt dòng NA/EU và định lượng PRRSV. Toàn bộ vùng ORF7 của bộ gen PRRSV được gắn vào plasmid pGEM T. | XÁC ĐỊNH QUY TRÌNH REAL TIME RT-PCR VỚI CHẤT NHUỘM EVAGREEN ĐINH LựơNG Va đinh chung VIRUT gây hội chứng RÔ loan sinh san vA Hồ HÂP TRÊN HEO Võ Khánh Hưng1 Nguyễn Văn Chi 1 Lê Nguyễn Ngọc nạnh2 Trần Thị Dân 3 Trần Thị Bích Liên13 Nguyễn Đình Quát13 Tóm tẮt Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp trên heo PRRS bệnh tai xanh do virut PRRSV gây nhiều thiệt hại kinh tế. PRRSV gồm 2 dòng châu Âu EU và Bắc Mỹ NA trong đó có chủng Trung Quốc - một biến chủng từ dòng Bắc Mỹ. Trong nghiên cứu này quy trình real time RT-PCR sử dụng chất phát huỳnh quang EvaGreen với cặp mồi F7 và R7 được thiết kế trên vùng ORF7 cho phép phân biệt dòng NA EU và định lượng PRRSV. Toàn bộ vùng ORF7 của bộ gen PRRSV được gắn vào plasmid pGEM T Easy và chuyển vào tế bào chủ E. coli DH5a để có mẫu DNA dùng trong tạo đường chuẩn định lượng của quy trình. Độ nhạy của quy trình real time RT-PCR được xác định là 101 bản sao pl. Tính đặc hiệu của phản ứng được khẳng định với porcine circovirus PCV và mẫu máu âm tính với PRRSV. Quy trình có thể định dòng PRRSV châu Âu và dòng Bắc Mỹ dựa vào sự chênh lệch về nhiệt độ nóng chảy Tm khi phân tích đường cong nhiệt độ nóng chảy. Nhiệt độ Tm của sản phẩm khuếch đại dòng châu Âu là 83 4oC và dòng Bắc Mỹ là 84 4oC CV 0 08 P 0 01 . Quy trình real time RT-PCR sử dụng EvaGreen cho kết quả nhanh nhạy và chính xác trong định dòng và định lượng PRRSV đã được áp dụng để phân biệt dòng cũng như định lượng PRRSV trên một số mẫu máu và mẫu ngoáy hầu họng heo từ một trại chăn nuôi công nghiệp. Từ khóa PRRSV real time RT-PCR Định chủng Phân tích nhiệt độ nóng chảy EvaGreen. QUATIFING AND GENOTYPING OF PORCINE REPRODUCTIVE AND RESPIRATORY SYNDROME VIRUS BY REAL-TIME RT-PCR USING EVAGREEN Võ Khánh Hưng Nguyễn Văn Chí Lê Nguyễn Ngọc Hạnh Trần Thị Dân Trần Thị Bích Liên Nguyễn Đình Quát SUMMARY Porcine reproductive and respiratory syndrome PRRS caused by PRRSV is detrimental to economy. There are two types of PRRSV being North American NA type and Europe EU type. EvaGreen-based real