tailieunhanh - Định vị miễn dịch hiển vi điện tử các kháng nguyên trong tế bào

Miễn dịch hiển vi điện tử là phương pháp kết hợp kỹ thuật miễn dịch với kỹ thuật hiển vi điện tử để định vị các thμnh phần miễn dịch đặc hiệu, các đại phân tử sinh vật. Phương pháp định vị hiển vi điện tử các thμnh phần miễn dịch trong tế bμo có thể tiến hμnh theo nhiều phương pháp khác nhau. Trước tiên tế bμo cần cắt mỏng tại nhiệt độ thấp (không đúc) hoặc tại nhiệt độ phòng (có đúc). Việc đánh dấu miễn dịch có thể thực hiện trực tiếp hoặc gián tiếp trước khi đúc, sau khi đúc hoặc trên lát cắt lạnh . | TCNCYH 26 6 - 2003 ĐỊNH VỊ MIỄN DỊCH HIEN vi ĐIỆN TỬ CÁC KHÁNG NGUyÊN TRONG TÊ BÀO Nguyễn Kim Giao Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương Sự kết hợp các kỹ thuật miễn dịch với kỹ thuật hiển vi điện tử đã được sử dụng từ lâu trong sinh học tế bào TB . Hiện nay phương pháp miễn dịch hiển vi điện tử MDHVĐT được áp dụng rộng rãi đặc biệt là nghiên cứu chẩn đoán vi sinh vật. Trong nghiên cứu này chúng tôi đã sử dụng kỹ thuật đánh dấu miễn dịch bằng vàng gián tiếp sau khi đúc với tế bào Vero nuôi cấy nhiễm vi rút sởi và tế bào TVP nuôi cấy nhiễm vi rút rota SA11. Theo dõi các hạt đen trên ảnh chúng tôi đã định vị được các vi rút rota trong tế bào TVP và nhận biết được quá trình hình thành của vi rút sởi trong TB Vero. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Miễn dịch hiển vi điện tử là phương pháp kết hợp kỹ thuật miễn dịch với kỹ thuật hiển vi điện tử để định vị các thành phần miễn dịch đặc hiệu các đại phân tử sinh vật. Phương pháp định vị hiển vi điện tử các thành phần miễn dịch trong tế bào có thể tiến hành theo nhiều phương pháp khác nhau. Trước tiên tế bào cần cắt mỏng tại nhiệt độ thấp không đúc hoặc tại nhiệt độ phòng có đúc . Việc đánh dấu miễn dịch có thể thực hiện trực tiếp hoặc gián tiếp trước khi đúc sau khi đúc hoặc trên lát cắt lạnh 1 3 . Mục tiêu nghiên cứu của đề tài nhằm 1. Lựa chọn và xác định được những điều kiện những thông số tốt nhất làm tiêu bản miễn dịch hiển vi điện tử phát hiện kháng nguyên mặt ngoài tế bào phù hợp với điều kiện Việt Nam. 2. Nghiên cứu xác định sự tồn tại của vi rút rota trên tế bào TVP và sự nhân lên của vi rút sởi trên tế bào Vero trong quá trình nuôi cấy II. VẬT LIỆU MẪU THIẾT BỊ VÀ QUI TRÌNH KỸ THUẬT NGHIÊN cứu 1. Nguyên lý chung 6 TCNCYH 26 6 - 2003 Hình 1 Qui trình làm tiêu bản định vị kháng nguyên trong tếbào sau đúc mẫu Những tế bào hoặc mô được cố định và đúc trong những khuôn đúc bằng những chất đặc biệt để giữ cấu trúc và bảo toàn chức năng miễn dịch. Những mẫu đúc được cắt thành những lát cực mỏng và đặt lên trên các lưới nicken. Tiếp đó những lát