tailieunhanh - Sử dụng Multiplex PCR để phát hiện vi khuẩn Helicobacter Pylori

Cho đến nay, các nhà nghiên cứu đều thống nhất cho rằng, gần một nửa dân số trên thế giới bị nhiễm vi khuẩn Helicobacter pylori [7,2]. Loại vi khuẩn Gram-âm này đã gây ra rất nhiều rối loạn nghiêm trọng về tiêu hoá, bao gồm viêm loét dạ dày và hành tá tràng với biểu hiện nặng nhất là ung th− dạ dày [4]. Cũng như nhiều năm trước đây, ngày nay, việc phát hiện và chẩn đoán các bệnh do nhiễm khuẩn Helicobacter pylori vẫn còn là mối quan tâm của các nhà khoa học, vì vi khuẩn hết. | _________________________________TCNCYH 22 2 - 2003 SỬ DUNG MULTIPLEX PCR ĐỂ phát hiện vi KHUÂN HELICOBACTER PYLORI Nguyễn Thị Thanh Lợi và Nguyễn Thị Hồng Hạnh Viện Công nghệ Sinh học - Trung tâm Khoa học tự nhiên và Công nghệ quốc gia Ở Việt Nam vi khuẩn Helicobacter pylori có thể mang các kiểu gien khác nhau do gien có thể bị đột biến hoặc khiếm khuyết. Vì thế việc phát hiện chúng bằng nhân bản một gien PCR đơn có thể cho các kết quả âm tính giả. Multiplex PCR nhằm khuyếch đại ba gien mã hoá cho các protein độc tính CagA Urease B và HP1125 của vi khuẩn Helicobacter pylori đã được nghiên cứu và có thể sử dụng trong thực tế lâm sàng ở Việt Nam. I. ĐẶT VẤN ĐỀ Cho đến nay các nhà nghiên cứu đều thống nhất cho rằng gần một nửa dân số trên thế giới bị nhiễm vi khuẩn Helicobacter pylori 7 2 . Loại vi khuẩn Gram-âm này đã gây ra rấ t nhiều rối loạn nghiêm trọng về tiêu hoá bao gồm viêm loét dạ dày và hành tá tràng với biểu hiện nặng nhất là ung thư dạ dày 4 . Cũng như nhiều năm trước đây ngày nay việc phát hiện và chẩn đoán các bệnh do nhiễm khuẩn Helicobacter pylori vần còn là mối quan tâm của các nhà khoa học vì vi khuẩn hết sức đa dạng về mặt sinh học 3 5 . Một vài nghiên cứu cho thấy nếu các cặp primers thiết kế cho phản ứng PCR để phát hiện vi khuẩn H. pylori ở các nước phương Tây không hiệu lực khi phát hiện các chủng châu Á 8 . Ở Việt Nam vi khuẩn Helicobacter pylori theo nghiên cứu được phân lập từ các bệnh nhân có thể khiếm khuyết gien cagA hoặc gien Urease B 6 . Do thế nếu chỉ tiến hành PCR đơn để nhằm phát hiện một gien thì các kết quả âm tính giả có thể xảy ra. Để khắc phục nhược điểm này chúng tôi đề nghị sử dụng Multiplex PCR để khuyếch đại đồng thời nhiều gien trong một ống nghiệm. Phương pháp này có ưu điểm là nhanh rẻ tiền và cho nhiều thông tin về vi khuẩn hơn là PCR đơn ba gien mã hóa cho ba protein bệnh lý UreaseB CagA và HP1125 - một protein màng ngoài của vi khuẩn - được lựa chọn cho thử nghiệm. Mục tiêu nghiên cứu là đánh giá khả năng sử dụng .