tailieunhanh - Tiểu luận: Điện di trên polyacrylamide gel

Đề tài Điện di trên polyacrylamide gel gồm các nội dung chính: điện di là gì? Điện di trên polyacrylamide gel, cơ chế và ứng dụng điện di trên polyacrylamide gel. | SEMINA Chủ đề : Điện di trên polyacrylamide gel GVHD: Nguyễn Thị Vân Anh SVTH: Nguyễn Thị Thuần NỘI DUNG 1 2 Cơ chế 3 Điện di là gì ? Điện di Polyacrylamide gel Ứng dụng 4 2 Điện di trên gel (electrophoresis hay gel electrophoresis ) áp dụng trong sinh học phân tử là một kĩ thuật để phân tích các phân tử DNA, RNA hay protein dựa trên các đặc điểm vật lý của chúng như kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điện tích (isoelectric point) Kĩ thuật này sử dụng một dung dịch đệm (buffer) để dẫn diện và tạo điện trường đều, một bản gel (thường là agarose hay polyacrylamide) đóng vai trò là thể nền để phân tách các phân tử, và các chất nhuộm khác nhau (ethidium bromide, bạc, xanh Coomassie) để phát hiện vị trí các phân tử trên gel sau khi điện di. 1 Điện di là gì ? . Polyacrylamide gel là gì ? Quá trình polymer hóa được xúc tác bởi ammoniumpersulfate (APS),N,N,N’,N’-tetramethylethylenediamine (TEMED). - Acrylamide là một đơn phân tử có cấu trúc: CH2=CH–CO–NH2 - Bis-acrylamide có cấu | SEMINA Chủ đề : Điện di trên polyacrylamide gel GVHD: Nguyễn Thị Vân Anh SVTH: Nguyễn Thị Thuần NỘI DUNG 1 2 Cơ chế 3 Điện di là gì ? Điện di Polyacrylamide gel Ứng dụng 4 2 Điện di trên gel (electrophoresis hay gel electrophoresis ) áp dụng trong sinh học phân tử là một kĩ thuật để phân tích các phân tử DNA, RNA hay protein dựa trên các đặc điểm vật lý của chúng như kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điện tích (isoelectric point) Kĩ thuật này sử dụng một dung dịch đệm (buffer) để dẫn diện và tạo điện trường đều, một bản gel (thường là agarose hay polyacrylamide) đóng vai trò là thể nền để phân tách các phân tử, và các chất nhuộm khác nhau (ethidium bromide, bạc, xanh Coomassie) để phát hiện vị trí các phân tử trên gel sau khi điện di. 1 Điện di là gì ? . Polyacrylamide gel là gì ? Quá trình polymer hóa được xúc tác bởi ammoniumpersulfate (APS),N,N,N’,N’-tetramethylethylenediamine (TEMED). - Acrylamide là một đơn phân tử có cấu trúc: CH2=CH–CO–NH2 - Bis-acrylamide có cấu trúc: CH2=CH–CO–NH–CH2–NH–CO–CH=CH2. Gel polyacrylamide là gel được tạo thành do sự polymer hóa các đơn phân tử acrylamide và N,N’-methylene-bis-acrylamide. Tách các đoạn DNA có kích thước 0,5 – 20 Kb Điện di theo phương nằm ngang Phân giải thay đổi khi nồng độ Agarose hay loại Agarose thay đổi Bước chuẩn bị đơn giản Phân tách đoạn DNA có kích thước < 1000 cặp base Điện di theo phương thẳng đứng Độ phân giải cao và ít thay đổi có thể phân biệt được những đoạn chỉ cách nhau 1 nucleotide Bước chuẩn bị phức tạp hơn phương pháp sử dụng Agarose Gel Agarose Gel Polyacrylamide NGUYÊN TẮC: Dựa vào đặc tính tích điện, tốc độ di chuyển khác nhau của các phân tử ion hay các tiểu phần protein trong trường điện Tách riêng biệt theo khả năng di động trong trường điện từ về 2 cực âm và dương Sự dịch chuyển Của các phân tử trên gel Điện tích của phân tử cần phân tách Kích thước của lỗ gel Điện trường Nếu nồng độ gel thấp sẽ tạo ra lỗ gel lớn, cho phép phân tách các phân tử sinh học có kích .