tailieunhanh - Đề tài : XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHANH VI KHUẨN DỊCH HẠCH (YERSINIA PESTIS) TỪ MẪU ĐẤT VÀ NƯỚC NHIỄM KHUẨN

Bệnh dịch hạch là một loại bệnh truyền nhiễm cấp tính. Vi khuẩn d ch hạch có thể chọn làm tác nhân khủng bố sinh học. Chẩn đoán nhanh vi khuẩn này từ đất nước là cần thiết. Vi khuẩn dịch hạch chứa 3 loại Plasmid đặc hiệu tạo nên các yếu tố độc lực gây bệnh. Mục tiêu: (1) Xác định độ nhạy và chính xác của phản ứng PCR chẩn đoán vi khuẩn dịch hạch. (2) Thực hiện phản ứng PCR với nguồn khuôn là ADN tổng số, ADN của plasmid pPCP1 và vi khuẩn nguyên vẹn với độ pha loãng khác. | TCNCYH 38 5 - 2005 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN NHANH VI KHUẨN DỊCH HẠCH YERSINIA PESTIS TỪ MẪU ĐẤT VÀ NƯỚC NHIỄM KHUẨN Lê Thanh Hoà1 Nguyễn Thị Bích Nga1 Nguyễn Thị Ngọc Dao1 Đỗ Ngọc Khuê 2 1 Viện Công nghệ Sinh học Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam 2 Phân Viện Công nghệ mới và Bảo vệ Môi trường Trung tâm KHKT - CNQS Bộ Quốc Phòng Bệnh dịch hạch là một loại bệnh truyền nhiễm cấp tính. Vi khuẩn dịch hạch có thể chọn làm tác nhân khủng bố sinh học. Chẩn đoán nhanh vi khuẩn này từ đất nước là cần thiết. Vi khuẩn dịch hạch chứa 3 loại Plasmid đặc hiệu tạo nên các yếu tố độc lực gây bệnh. Mục tiêu 1 Xác định độ nhạy và chính xác của phản ứng PCR chẩn đoán vi khuẩn dịch hạch. 2 Thực hiện phản ứng PCR với nguồn khuôn là ADN tổng số ADN của plasmid pPCPl và vi khuẩn nguyên vẹn với độ pha loãng khác nhau 3 Giả nghiệm vi khuẩn trong mẫu đất - nước và thực hiện chẩn đoán nhanh bằng PCR. Đôi tượng và phương pháp Vi khuẩn dịch hạch đã vô hoạt. ADN tổng số bao gồm ADN của vi khuẩn dịch hạch được tách bằng DNeasy Kit dùng cặp mồi PLAF - PLAR bám trên gen pla để nhân đoạn gen pla có độ dài 480bp. Sau khi xác định độ nhạy của phản ứng PCR để thực hiện mục tiêu xây dựng Kit chẩn đoán nhanh Y. Pestis vi khuẩn được hoà trong mẫu đất và nước theo phương pháp giả nghiệm để kiểm nghiệm phản ứng PCR nhằm xây dụng kit phát hiện phân tử. Kết quả Với ADN tổng sốpha loãng phản ứng PCR thực hiện thành công ở hàm lượng 0 6ng tương đương với 1 vi khuẩn Y Pestis. Với vi khuẩn nguyên vẹn không cần tách ADN tổng số với lượng vi khuẩn pha loãng ở nồng độ từ 101 đến 102 khoảng 100 -10 vi khuẩn vẫn cho PCR đặc hiệu. Với phương pháp giả nghiệm hoà vi khuẩn vào trong mẫu đất nước PCR đặc hiệu vẫn thực hiện thành công ở độ pha loãng khoảng 1 ng ADN và 4 vi khuẩn làm khuôn. Kết luận Như vậy bước đầu Kit chẩn đoán phân tử vi khuẩn dịch hạch đã thử nghiệm thành công từ các loại mẫu kể cả từ đất nước sử dụng chỉ thị gen pla của Plasmid pPCP1. Từ khoá dịch hạch Yersinia pestis plasmid pPCP1 gen pla PCR .