Đang chuẩn bị liên kết để tải về tài liệu:
Hóa Enzyme - Phân Tích Phân Tử Enzyme Phần 3

Chiết rút enzyme Muốn tìm hiểu toàn bộ hoạt động sống của cơ thể sinh vật, chúng ta phải biết bản chất của những biến đổi hóa học xảy ra trong từng mô tế bào. | 26 thể được các sinh vật tiết ra môi trường sống. Đó là các enzyme ngoài tế bào extracellular . Enzyme vi sinh vật thường chiết là enzyme ngoại bào. 27 2.2.2. Chiết rút enzyme Muốn tìm hiểu toàn bộ hoạt động sống của cơ thể sinh vật chúng ta phải biết bản chất của những biến đổi hóa học xảy ra trong từng mô tế bào. Điều đó chỉ thực hiện được khi chúng ta tách được các tế bào ra khỏi các mô và chiết rút cũng như làm sạch các enzyme chứa trong chúng. Từ các dạng enzyme tinh khiết thu được chúng ta có thể nghiên cứu sâu sắc cơ chế tác dụng tính đặc hiệu trong hoạt động xúc tác của chúng. Tùy theo những đặc tính riêng biệt của từng loại enzyme mà lựa chọn phương pháp làm sạch cho thích hợp. Trong quá trình tinh chế enzyme mặc dầu trình tự và các thủ thuật ở các bước có thể thay đổi song vẫn có những nguyên tắc chung. Như chúng ta đã biết trong cơ thể sinh vật enzyme có trong tế bào chất và các cấu tử nhân microsome ty thể lysosome. của tế bào. Tế bào được bao bọc bằng một lớp màng. Lớp màng này ở vi khuẩn đôi khi rất bền và dày. Người ta còn thấy nhiều enzyme liên kết rất chặt chẽ với các cấu tử của tế bào. Các phân tử enzyme không có khả năng đi qua màng của tế bào và màng của các cấu tử của tế bào. Do đó để có thể chiết rút các enzyme nội bào bước đầu tiên là phải phá vỡ cấu trúc của các tế bào có chứa enzyme và chuyển chúng vào dung dịch. Có thể phá vỡ cấu trúc của các tế bào bằng các biện pháp cơ học như nghiền với bột thủy tinh hoặc cát thạch anh làm đồng hóa bằng thiết bị đồng hóa homogenizator . Thiết bị có chày thủy tinh gắn với một môtơ quay và có thể điều chỉnh được tốc độ quay theo yêu cầu. Các tế bào giữa chày thủy tinh và thành cối sẽ bị phá hủy. Để việc phá vỡ có hiệu quả ở mô thực vật trước khi nghiền người ta thường thái nhỏ mẫu để vào ngăn đá hoặc cho trương nước ví dụ như đối với mẫu hạt khô . Còn ở các mô của động vật như gan hoặc thận khi chiết enzyme người ta cần cắt bỏ các mô liên kết. Muốn tách được các enzyme trong các cấu tử của tế bào người ta